1樓:
去查最適濃度,不如直接做雙向免疫擴散,將抗原稀釋到各種濃度,效果也很明顯。
2樓:johnny王子
條件自己摸的濃度,各抗原不一樣而定。多看看文獻一般有提到。
elisa技術測定單轉殖抗體效價方法有嗎?
3樓:匿名使用者
elisa 是以免疫學反應為基礎,將抗原、抗體的特異性反應與酶對底物的高效催化作用相結合起來的一種敏感性很高的試驗技術。免疫酶技術是將酶標記在抗體/抗原分子上,形成酶標抗體/酶標抗原,稱為酶結合物。該酶結合物的酶在免疫反應後,作用於底物使之呈色,根據顏色的有無和深淺,定位或定量抗原/抗體。
elisa 法是免疫酶技術的一種,其特點是利用聚苯乙烯微量反應板(或球)吸附抗原/抗體,使之固相化,免疫反應和酶促反應都在其中進行。在每次反應後都要反覆洗滌,這既保證了反應的定量關係,也避免了末反應的游離抗體/抗原的分離步驟。在elisa 法中.酶促反應只進行一次,而抗原、抗體的免疫反應可進行一次或數次,即可用二抗(抗抗體)、三抗再次進行免疫反應。
目前常用的幾種elisa 方法有:測定抗體的間接法,測定抗原的雙抗體夾心法和測定抗原的競爭法等。本實驗採用間接法測定單轉殖抗體效價。
其主要過程為:首先將已知定量抗原吸附在聚苯乙烯微量反應板的凹孔內,加待測抗體,保溫後洗滌以除去未結合的雜蛋白質,加酶標抗抗體,保溫後洗滌,加底物保溫30分鐘後,加酸或鹼終止酶促反應,用目測或光電比色測定抗體含量。
4樓:匿名使用者
間接法(測抗體)
包被抗原:用包被緩衝液稀釋抗原至最適濃度(5~20μg/ml)各0.3ml加於微反應板每個凹孔中,4°C過夜或37°C水浴2~3小時,貯存冰箱
洗滌:移去包被液,凹孔用洗滌緩衝液(含0.05%吐溫-20)洗3次,每次5分鐘
加被檢標本:每凹孔加入用含有0.05%吐溫-20的稀釋緩衝液稀釋的被檢血清各0.2ml,37°C,作用1~2小時
洗滌:重複2
加入酶結合物:每凹孔加入稀釋緩衝液稀釋的酶結合物0.2ml 37°C作用1~2小時
間接法(測抗體)
洗滌:重複2
加入0.2ml底物溶液於每個凹孔,(o.p.d或o.t),室溫作用30分鐘(另作一空白對照,0.4ml底物加0.1ml終止劑)。
加終止劑:每凹孔加2m h2so4或2m檸檬酸0.05ml。
觀察記錄結果:目測或用酶標比色計測定(o.p.d用492nm)o.d值。
5樓:匿名使用者
yes. serial dilution of your ab by ten-fold,and find where the minimum limit of o/n>3
藍耳單抗製備時抗體效價達到多少時可以進行加強免疫
6樓:橙子的大世界觀
藍耳單抗製備時抗體效價需要分不同時間進行加強免疫.。
一般用蛋白抗原,加上佐劑,第一次免疫產生的抗體會比較低,需要加強免疫後,才會產生比較高水平的抗體。對於只是檢測為目的的免疫,可以免疫兩次就行了,中間間隔7-10天,第二次免疫後10-15天採血分離血清,抗體水平達到檢測或者其他實驗目的都可以了。如果是為了得到高水平的抗體,並且進行抗體的純化,進行後續試驗,可以進行三次免疫,分別是0日,7日,28日免疫三次後,過15天(第43日)左右進行採血分離血清。
一般經過2次免疫的血清中,抗體倍比稀釋6次左右都可以見到免疫沉澱線,經過3次免疫的抗體做的比較好的話會稀釋9次左右也可以見到沉澱線。抗原蛋白大小不同,抗原位點的多少,抗原的濃度,免疫劑量,動物的身體狀態都會對產生抗體的水平產生影響,抗體會有差異。
7樓:青山綠水繞歡歌
你說的應該不是單轉殖抗體,而是純化蛋白的抗體,免疫的是動物。一般用蛋白抗原,加上佐劑,第一次免疫產生的抗體會比較低,需要加強免疫後,才會產生比較高水平的抗體。對於只是檢測為目的的免疫,可以免疫兩次就行了,中間間隔7-10天,第二次免疫後10-15天採血分離血清,抗體水平達到檢測或者其他實驗目的都可以了。
如果是為了得到高水平的抗體,並且進行抗體的純化,進行後續試驗,可以進行三次免疫,分別是0日,7日,28日免疫三次後,過15天(第43日)左右進行採血分離血清。一般經過2次免疫的血清中,抗體倍比稀釋6次左右都可以見到免疫沉澱線,經過3次免疫的抗體做的比較好的話會稀釋9次左右也可以見到沉澱線。抗原蛋白大小不同,抗原位點的多少,抗原的濃度,免疫劑量,動物的身體狀態都會對產生抗體的水平產生影響,抗體會有差異。
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