1樓:龍鳳油洺月
那就是有其他的基點,或者計算方法不一樣(搬運過來的)
組織特異性的qrt-pcr怎麼計算表達量
2樓:南京金益柏生物科技****
(qrt-pcr) ,是一種應用廣泛的研究基因表達模式的方法,尤其是在樣品量少
為什麼螢光定量pcr對照組相對表達還會有bar值
3樓:天枰小蝌蚪吖
螢光定量pcr會加入帶抄有螢光基團襲的探針,bai探針是能和目的基因結合的單
鏈dudna,如果合成雙鏈dna後,zhi螢光基團就dao會啟用發光,所以實時檢測反應物的螢光強度,反應的就是雙鏈dna的濃度,由於合成雙鏈dna的速率和模板濃度有關,所以和參考曲線比較以後是可以計算出模板的相對濃度,當模板是訊號rna是,其反應的就是基因發達的量。
求助螢光定量pcr,我的實驗組和對照組的目的基因ct值非常相近,但是兩組內參基因的ct值相差5左右,正常嗎
4樓:匿名使用者
肯定不行的。螢光定量pcr通過以內參基因作為標準進行相對定量,即眾所e68a8462616964757a686964616f31333330363736周知的2–δδct 法,(前提是要求在所有測試樣本中恆定表達的已知參照基因,而且表達水平不受研究條件及處理方式的影響)。如果實驗組和對照組的目的基因ct值非常接近(前提是cdna稀釋的倍數一致), 說明二者的目的基因無明顯變化呀。
4.2.3.1 2–δδct (livak) 方法
進行相對基因表達分析普遍採用操作簡便的2–δδct 法,條件是目標基因和參照基
因擴增效率都接近100% 且相互間效率偏差在5% 以內。使用2–δδct 法之前,必須驗
證目標基因和參照基因的擴增效率。
一旦確定目標基因和參照基因有相似且接近100% 的擴增效率,你就可以確定不
同樣本中目標基因表達水平的相對差異,步驟如下:
首先,對所有的測試樣和校準樣本,用內參基因的ct 值歸一目標基因的ct 值:
δct(test) = ct(target, test) – ct(ref, test)
δct(calibrator) = ct(target, calibrator) – ct(ref, calibrator)
其次,用校準樣本的δct 值歸一試驗樣本的δct 值:
δδct = δct(test) – δct(calibrator)
最後,計算表達水平比率:
2–δδct = 表達量的比值
得到的結果是通過參照基因表達水平校準的試驗樣本中目標基因相對於校準樣本
的增加或減少的倍數,用參照基因校準目標基因表達的目的是彌補樣本組織量的差異。
如果目標和內參基因的擴增效率不相近,可以優化或重新設計實驗,或者可以
採用4.2.3.3 節中闡述的pfaffl 法。另外,如果目標基因和參照基因有同樣的擴增效
率,但是擴增效率不等於2,那麼,2–δδct 法的公式可以修正為用實際擴增效率值代
替等式中的2。例如,如果目標基因和參照基因的擴增效率都為1.95,計算公式為
1.95–δδct。
下邊的假定的例子告訴你如何使用2-δδct 法來決定乙個目標基因(p53)在腫瘤
和正常卵巢組織的表達的相對水平。
例子:正常和腫瘤組織50ngrna 得到的cdna 用來分析p53(目標基因)和
gapdh(參照基因)。gapdh 用來作為參照是因為以前的研究表明這個基因在正常
和腫瘤組織中沒有差異。
樣品ct p53 (目標基因) ct gapdh (參照基因)
正常(校準樣本) 15.0 16.5
腫瘤(試驗樣本) 12.0 15.9
為了用上面介紹的方法進行相對定量分析,在檢測和校準的樣品中靶基因的ct
值和內參的ct 值進行歸一化:
δct(正常) = 15.0 – 16.5 = –1.5
δct(腫瘤)= 12.0 – 15.9 = –3.9
然後,試驗樣本的與校準樣本的δct 值進行歸一化
δδct = δct(腫瘤)– δct(正常)
= –3.9 – (–1.5) = –2.4
最後,計算表達比率:
2–δδct = 2–(–2.4) = 5.3
因此,腫瘤細胞的p53 表達水平比正常細胞高5.3 倍
希望能幫上你。
5樓:匿名使用者
你的實驗組和度招租的模板濃度不一樣吧,那樣內參基因的ct值肯定是不一樣的!
6樓:匿名使用者
正常的,因為你提取兩個材料的rna的量不同。你根據資料算下表達量具體是差幾倍,看是否與你的預期相符
請教qrt-pcr資料統計問題
7樓:匿名使用者
這樣算:
你先把幾次試驗的對照組的平均值設為1, 再把每個單獨試驗對照組的數值算出和這個對照組平均值的差異,就可以計算標準差了。
這麼簡單的統計分析,用不著spss吧, excel就可以解決了。
8樓:匿名使用者
rt-qpcr由普通pcr技術發展而來,它是在傳統pcr反應體系中加入螢光化學物質(螢光染料或者螢光探針),根據各自不同的發光機制實時檢測pcr退火、延伸過程中螢光訊號變化來計算pcr每個迴圈中產物的變化量,目前最常見的方法為biog染料法螢光染料法和biog探針法。
9樓:life實驗室
老師們好,「你先把幾次試驗的對照組的平均值設為1, 再把每個單獨試驗對照組的數值算出和這個對照組平均值的差異,」那麼δδct = δct實驗組樣品 - δct對照組樣品,這裡的「δct對照組樣品」用的應該是平均值還是單個的測定值,假如測定的是不同部位(根、莖、葉),每個部位都有對照,用的應該是根、莖和葉所有對照的平均值還是其他?
相對螢光定量2Ct,怎麼表達對照組的相對表達量
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通過對照實現單一變數,從而排除了無關變數的影響。在實驗中,為何要設定對照組?排除沒有考慮到的實驗室環境因素對其產生的影響。比如明明是實驗室溫度過高導致菌落不能產生,但是沒有對照組的話,你會認為是自己的培養基有殺菌效果.什麼是單一組實驗和對照組實驗?在實驗中為什麼設定對照組 對照bai是實驗所控制的d...
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簡單的定義就是 做處理的一組 稱為實驗組,不做處理的一組稱為對照組 實驗組是內指認為改容變其自然狀態,即人為控制實驗變數的組.實驗組是指在原基礎上有乙個變數條件的.對照組是指無變數條件的.通常,乙個實驗總分為實驗組和對照組.實驗組,是接受實驗變數處理的物件組 對照組,也稱控制組,對實驗假設而言,是不...