1樓:北京理工大學出版社
dna作為遺傳物質的基本特點就是能夠準確地進行自我複製。在合成dna時,決定其結構特異性的遺傳資訊來自其本身,必須由原來存在的dna分子為模板來合成新的dna分子。這種以自身dna為模板,以脫氧核苷酸為底物催化合成新的dna的酶稱為dna聚合酶。
在微生物、植物和動物中都發現有這種酶,而且原核細胞和真核細胞所含的dna聚合酶不只是一種。大腸桿菌中存在三種,分別稱為dna聚合酶ⅰ、ⅱ和ⅲ;真核細胞中也分離出四種,分別稱dna聚合酶α、β、γ和線粒體dna聚合酶mt。目前常用於基因工程的為大腸桿菌dna聚合酶i和tdna聚合酶4噬菌體感染大腸桿菌所得,而用於pcr擴增技術的多為耐熱的taqdna聚合酶來自一種水生嗜熱桿菌。
2樓:樊清竹羅醜
聚合的是磷酸二脂鍵。dna複製時,以dna為模板,在引物(主要是rna)存在下,聚合酶ⅰ催化聚合反應,使底物逐個依5′→3′方向聚合;dna新鏈得以延長,若參入的核苷酸有錯誤,該酶即顯示外切酶活性,經其切除,以保證複製的真實性。
什麼是dna聚合酶?
3樓:北京理工大學出版社
dna聚合酶的種類很多,它們在細胞中的dna複製過程中起著重要的作用。dna聚合酶有dna聚合酶ⅰ、ⅱ、ⅲ三類。基因工程中很多步驟都需要dna聚合酶催化dna體外合成反應,這些酶作用時大多都需要模板,合成產物的序列與模板互補。
基因工程常用的dna聚合酶有:①大腸桿菌聚合酶ⅰ(全酶);②大腸桿菌聚合酶ⅰ大片段(klenow片段);③t4噬菌體dna聚合酶;④t7噬菌體聚合酶及經修飾的t7噬菌體聚合酶(測序酶),⑤耐熱dna聚合酶(taqdna聚合酶);⑥末端轉移酶(末端脫氧核苷酸轉移酶,也屬dna聚合酶);⑦逆轉錄酶(依賴於rna的dna聚合酶)。
dna聚合酶ⅰ是基因工程中最常用的工具酶。dna聚合酶ⅱ是一條120kd的肽鏈,催化5′→3′方向合成dna,也具有3′→5′外切酶活性但沒有5′→3′外切酶活性。可能在當細胞dna受到化學或物理損傷時,dna聚合酶ⅱ在修復過程中起特殊作用。
dna聚合酶ⅲ全酶是一種大於250kd,由多種亞基組成的蛋白質,它是不對稱的二聚體,兩個亞基可分別同時催化前導鏈(leadingstrand)及後隨鏈的合成。dna聚合ⅲ與dna聚合酶ⅰ相同,也具有3′→5′外切酶活性。在dna聚合作用中,核苷酸新增的錯誤率達1/1000。
由於dna聚合酶ⅰ和dna聚合酶ⅲ全酶的3′→5′外切酶活性,可以終止核苷酸加入並除去錯誤核苷酸,然後可繼續加入正確的核苷酸,可將錯誤率減少到百萬分之一或更少。
大腸桿菌dna聚合酶ⅰ(全酶):dna聚合酶ⅰ的分子量為109kd,是一條約1000個氨基酸殘基的多肽鏈。它具有三種活性:
①5′→3′dna聚合酶活性(能以單鏈dna為模板,在3′-oh引物的引導下,按5′→3′方向,合成互補的dna序列),②3′→5′外切核酸酶活性(能夠去除延長的核酸鏈上的3′-oh末端上的核苷酸,可以沿3′→5′方向降解雙鏈或單dna鏈dna,釋放5′-單核苷酸),③5′→3′外切核酸酶活性(能從dna鏈5′-oh末端降解雙螺旋dna的一條鏈,沿5′→3′方向,釋放出單核苷酸或寡核苷酸)。dna聚合酶ⅰ的主要用途:①用切口平移方法標記dna(可作雜交探針),②利用其5′→3′外切核酸酶活性降解寡核苷酸作為合成cdna第二鏈的引物,③用於對dna分子的3′突出尾進行末端標記,用於dna序列分析。
大腸桿菌dna聚合酶ⅰ大片斷(klenow):klenow片斷是用枯草桿菌蛋白酶裂解完整的dna聚合酶ⅰ產生,或通過轉殖技術而獲得。此酶是單一多肽鏈,分子量76kd。
它具有5′→3′聚合酶活性和3′→5′外切酶活性,而無5′→3′外切酶活性。klenow片段的主要用途:①補平限制性內切酶切割dna產生的3′凹端;②用[32p]dbtp補平3′凹端,對dn**段進行末端標記;③對帶3′突出端的dna進行末端標記;④在cdna轉殖中,用於合成cdna第二鏈;⑤在體外誘變中,用於從單鏈模板合成雙鏈dna;⑥應用雙脫氧鏈末端終止法進行dna測序。
t4噬菌體dna聚合酶:t4噬菌體dna聚合酶(分子為114kd),與klenow片斷相似的是:都具有5′→3′聚合酶活性及3′→5′外切核酸酶活性。
其3′→5′外切酶活性對單鏈dna的作用比對雙鏈dna的作用更強。它的外切核酸酶活性比klenow片段要強200倍。由於它不從單鏈dna模板上置換寡核酸引物,因此在體外誘變反應中,它的效率比klenow片段更強。
它的主要用途:①補平或標記限制性內切酶消化dna後產生的3′凹端,②對帶有3′突出端的dna分子進行末端標記;③標記用作探針的dn**段。④將雙鏈dna的末端轉化成為平端。
⑤使結合於單鏈dna模板上的誘變寡核苷酸引物得到延伸。
ts噬菌體dna聚合酶及由此改造的測序酶:t7噬菌體感染大腸桿菌誘生的dna聚合酶,是兩種緊密結合的蛋白質的複合體。這兩種蛋白質一種是t7噬菌體基因5蛋白,另一種是宿主蛋白的硫氧還原蛋白。
該酶是所有已知dna聚合酶中持續合成能力最強的乙個,它所催化合成的dna的平均長度要比其他dna聚合酶催化合成的dna平均長度大得多。它的3′→5′外切核酸酶活性約為klenow片段的1000倍。它沒有5′→3′外切酶核酸酸活性。
它的主要用途:①用於拷貝長段模板的引物延伸反應,②通過補平或交換(置換)反應進行快速末端標記。
t7噬菌體聚合酶中基因5蛋白中乙個結構區,與大腸桿菌dna聚合酶ⅰ的dna結合處及聚合結構區高度同源。這一結合及聚合結構區包含了該蛋白近羥基端的序列,而其氨其端則具有強有力的3′→5′外切核酸活性。用氧作還原劑把該酶分子與氧及二價鐵離子處理可使酶3′→5′外切核酸酶活性滅活而保留其聚合酶活性。
改造後的酶的持續合成能力很強,是雙脫氧鏈終止法對長段dna進行測序的理想用酶。後來由unitedstatesbiochemical公司以測序酶(sequenase)作為商品名投放市場,現在已通過基因工程手段生產出一種改進的測序酶(2.0版),它完全喪失了外切核酸酶活性。
耐熱dna聚合酶(taqdna聚合酶):這是一種耐熱的依賴dna的dna聚合酶(分子量65kd,原是從嗜熱的水生菌thermusaquaticus中純化來的,現在以基因工程生產並**(amplitaqtm)。這些酶具有依賴於聚合物5′→3′外切核酸酶活性。
用途:①用於dna測序,②用於聚合酶鏈式反應(pcr)對dn**段進行體外擴增。
末端轉移酶:從動物胸腺和骨髓中提取。此酶催化脫氧核苷酸新增到dna分別的3′-oh末端上,催化作用不要求有模板,但需co2+的存在。
末端轉移酶可作一群dna分子的3′-oh末端接上寡da或dc,而給另一群dna分子的3′-oh末端接上寡dt或dg,混合這兩群分子,即可使同聚物尾部退火形成環狀分子。用途:①給載體或cdna加上互補的同聚尾,②用於dn**段3′末端的放射同位素標記。
dna聚合酶的作用是什麼?
4樓:倒塌的巴別塔
[1]聚合
作用:在引物rna'-oh末端,以dntp為底物,按模板dna上的指令由dnapolⅰ逐個將核苷酸加上去,就是dnapolⅰ的聚合作用。
[2]3'→5'外切酶活性——校對作用:這種酶活性的主要功能是從3'→5'方向識別和切除不配對的dna生長鏈末端的核苷酸。
[3]5'→3'外切酶活性——切除修復作用:5'→3'外切酶活性就是從5'→3'方向水解dna生長鏈前方的dna鏈,主要產生5'-脫氧核苷酸。
[4]焦磷酸解作用:dnapolⅰ的這種活性可以催化3'末端焦磷酸解dna分子。這種作用就是無機焦磷酸分解dna生長鏈,可以認為是dna聚合作用的逆反應,而且這種水解dna鏈作用需要有模板dna的存在。
[5]焦磷酸交換作用:催化dntp末端的ppi同無機焦磷酸的交換反應。反應式為32p32pi+dnppp←dnp32p32p+ppi→dna
5樓:匿名使用者
樓上3個居然沒有乙個對的。
dna聚合酶的作用是以一條dna單鏈為模板,將三磷酸脫氧核醣核苷酸通過磷酸二酯鍵連線成為與單鏈互補的另一條單鏈。
6樓:鏡若風
把游離的核苷酸加到dna長鏈上,讓鹼基配對
7樓:筱筱的月亮
作用於互補鹼基之間,是形成氫鍵
8樓:曦草
9樓:匿名使用者
連線dna鹼基(a-t c-g)
dna聚合酶有什麼作用?
10樓:漫閱科技
dna作為遺傳物質的基本特點就是能夠準確地進行自我複製。在合成dna時,決定其結構特異性的遺傳資訊來自其本身,必須由原來存在的dna分子為模板來合成新的dna分子。這種以自身dna為模板,以脫氧核苷酸為底物催化合成新的dna的酶稱為dna聚合酶。
在微生物、植物和動物中都發現有這種酶,而且原核細胞和真核細胞所含的dna聚合酶不只是一種。大腸桿菌中存在三種,分別稱為dna聚合酶ⅰ、ⅱ和ⅲ;真核細胞中也分離出四種,分別稱dna聚合酶α、β、γ和線粒體dna聚合酶mt。目前常用於基因工程的為大腸桿菌dna聚合酶i和tdna聚合酶4噬菌體感染大腸桿菌所得,而用於pcr擴增技術的多為耐熱的taqdna聚合酶來自一種水生嗜熱桿菌。
11樓:斛載葛代雙
[1]聚合作用:在引物rna'-oh末端,以dntp為底物,按模板dna上的指令由dnapolⅰ逐個將核苷酸加上去,就是dnapolⅰ的聚合作用。
[2]3'→5'外切酶活性——校對作用:這種酶活性的主要功能是從3'→5'方向識別和切除不配對的dna生長鏈末端的核苷酸。
[3]5'→3'外切酶活性——切除修復作用:5'→3'外切酶活性就是從5'→3'方向水解dna生長鏈前方的dna鏈,主要產生5'-脫氧核苷酸。
[4]焦磷酸解作用:dnapolⅰ的這種活性可以催化3'末端焦磷酸解dna分子。這種作用就是無機焦磷酸分解dna生長鏈,可以認為是dna聚合作用的逆反應,而且這種水解dna鏈作用需要有模板dna的存在。
[5]焦磷酸交換作用:催化dntp末端的ppi同無機焦磷酸的交換反應。反應式為32p32pi+dnppp←dnp32p32p+ppi→dna
為什麼dna聚合酶需要引物而rna聚合酶不需要
假面 dna複製的保守性主要靠包括聚合酶外切活性在內的校正和修復系統。dna複製中引發酶合成的引物是rna,它本身就有較高的錯誤率,在複製完成前是要被切除的,這和pcr是不同的。岡崎片段就是通過引發酶 從頭合成 的。如果生物體內dna複製也需要dna引物,而且不切除,那麼引物片段錯配的發生反而會降低...
逆轉錄需要DNA聚合酶嗎
逆轉錄酶就是一種特殊的dna聚合酶。一般dna聚合酶是以dna為模板的,而逆轉錄酶則是以rna為模板的。需要 單鏈rna在逆轉錄酶的作用下形成rna dna雜交雙鏈,在核酸酶h的作用下將rna單鏈降解,剩下單鏈dna,在dna聚合酶的作用下形成雙鏈dna 需要逆轉錄是把rna dna 的過程 第一步...
DNA聚合酶有哪些特點?其作用是如何發生的
這個問題我有些模糊。不過對樓上回答有點不同見解 dna聚合酶要分原核和真核專來區別對待。聚合酶屬1 2 3是屬於原核的dna聚合酶 才屬於真核。pol3和pol 在我們的日常稱呼和應用中還是有區別的。希望你能夠重視。簡述三種dna聚合酶的作用特點和主要功能 dna聚合酶抄1 1.能催化單個脫氧核醣核...