1樓：匿名使用者
一、原理
根據葉綠體色素提取液對可見光譜的吸收,利用分光光度計在某一特定波長測定其吸光度,即可用公式計算出提取液中各色素的含量.根據朗伯—比爾定律,某有色溶液的吸光度a與其中溶質濃度c和液層厚度l成正比,即a＝αcl式中：α比例常數.
當溶液濃度以百分濃度為單位,液層厚度為1cm時,α為該物質的吸光係數.各種有色物質溶液在不同波長下的吸光係數可通過測定已知濃度的純物質在不同波長下的吸光度而求得.如果溶液中有數種吸光物質,則此混合液在某一波長下的總吸光度等於各組分在相應波長下吸光度的總和.
這就是吸光度的加和性.今欲測定葉綠體色素混合提取液中葉綠素a、b和類胡蘿蔔素的含量,只需測定該提取液在三個特定波長下的吸光度a,並根據葉綠素a、b及類胡蘿蔔素在該波長下的吸光係數即可求出其濃度.在測定葉綠素a、b時為了排除類胡蘿蔔素的干擾,所用單色光的波長選擇葉綠素在紅光區的最大吸收峰.
二、材料、儀器裝置及試劑
(一)材料：新鮮(或烘乾)的植物葉片
(二)儀器裝置：1.分光光度計；2.
電子頂載天平(感量0.01g)；3.研缽；4.
棕色容量瓶；5.小漏斗；6.定量濾紙；7.
吸水紙；8.擦境紙；9.滴管.
(三)試劑：96％乙醇(或80％丙酮)；石英砂；碳酸鈣粉.
三、實驗步驟
1.取新鮮植物葉片(或其它綠色組織)或幹材料,擦淨組織表面汙物,剪碎(去掉中脈),混勻.
2.稱取剪碎的新鮮樣品0.2g,共3份,分別放入研缽中,加少量石英砂和碳酸鈣粉及2～3ml95％乙醇,研成均漿,再加乙醇10ml,繼續研磨至組織變白.靜置3～5min.
3.取濾紙1張,置漏斗中,用乙醇濕潤,沿玻棒把提取液倒入漏斗中,過濾到25ml棕色容量瓶中,用少量乙醇沖洗研缽、研棒及殘渣數次,最後連同殘渣一起倒入漏斗中.
4.用滴管吸取乙醇,將濾紙上的葉綠體色素全部洗入容量瓶中.直至濾紙和殘渣中無綠色為止.
最後用乙醇定容至25ml,搖勻.5.把葉綠體色素提取液倒入光徑1cm的比色杯內.
以95％乙醇為空白,在波長665nm、649nm下測定吸光度.
四、實驗結果計算：將測定得到的吸光值代入下面的式子：ca=13.
95a665－6.88a649；cb=24.96a649－7.
32a665.據此即可得到葉綠素a和葉綠素b的濃度(ca、cb：mg/l),二者之和為總葉綠素的濃度.
最後根據下式可進一步求出植物組織中葉綠素的含量：
葉綠素的含量(mg/g)=[葉綠素的濃度×提取液體積×稀釋倍數]/樣品鮮重(或乾重).
2樓：掌睿廣修禎
稀釋倍數為1.
在放入比色杯時，如果先加1ml提取液再加4ml乙醇，之後用乙醇比色，則稀釋倍數為5倍，樓主若直接從容量瓶提取液倒入比色杯則稀釋倍數為1.
葉綠素含量測定中的稀釋倍數怎麼算？ 20
3樓：
稀釋倍數為1.
在放入比色杯時，如果先加1ml提取液再加4ml乙醇，之後用乙醇比色，則稀釋倍數為5倍，樓主若直接從容量瓶提取液倒入比色杯則稀釋倍數為1.
4樓：文源閣
一、原理
根據葉綠體色素提取液對可見光譜的吸收，利用分光光度計在某一特定波長測定其吸光度，即可用公式計算出提取液中各色素的含量。根據朗伯—比爾定律，某有色溶液的吸光度a與其中溶質濃度c和液層厚度l成正比，即a＝αcl式中：α比例常數。
當溶液濃度以百分濃度為單位，液層厚度為1cm時，α為該物質的吸光係數。各種有色物質溶液在不同波長下的吸光係數可通過測定已知濃度的純物質在不同波長下的吸光度而求得。如果溶液中有數種吸光物質，則此混合液在某一波長下的總吸光度等於各組分在相應波長下吸光度的總和。
這就是吸光度的加和性。今欲測定葉綠體色素混合提取液中葉綠素a、b和類胡蘿蔔素的含量，只需測定該提取液在三個特定波長下的吸光度a，並根據葉綠素a、b及類胡蘿蔔素在該波長下的吸光係數即可求出其濃度。在測定葉綠素a、b時為了排除類胡蘿蔔素的干擾，所用單色光的波長選擇葉綠素在紅光區的最大吸收峰。
二、材料、儀器裝置及試劑
(一)材料：新鮮(或烘乾)的植物葉片
(二)儀器裝置：1.分光光度計；2.
電子頂載天平(感量0.01g)；3.研缽；4.
棕色容量瓶；5.小漏斗；6.定量濾紙；7.
吸水紙；8.擦境紙；9.滴管。
(三)試劑：96％乙醇(或80％丙酮)；石英砂；碳酸鈣粉。
三、實驗步驟
1. 取新鮮植物葉片(或其它綠色組織)或幹材料，擦淨組織表面汙物，剪碎(去掉中脈)，混勻。
2. 稱取剪碎的新鮮樣品0.2g，共3份，分別放入研缽中，加少量石英砂和碳酸鈣粉及2～3ml95％乙醇，研成均漿，再加乙醇10ml，繼續研磨至組織變白。靜置3～5min。
3. 取濾紙1張，置漏斗中，用乙醇濕潤，沿玻棒把提取液倒入漏斗中，過濾到25ml棕色容量瓶中，用少量乙醇沖洗研缽、研棒及殘渣數次，最後連同殘渣一起倒入漏斗中。
4. 用滴管吸取乙醇，將濾紙上的葉綠體色素全部洗入容量瓶中。直至濾紙和殘渣中無綠色為止。
最後用乙醇定容至25ml，搖勻。5. 把葉綠體色素提取液倒入光徑1cm的比色杯內。
以95％乙醇為空白，在波長665nm、649nm下測定吸光度。
四、實驗結果計算：將測定得到的吸光值代入下面的式子：ca=13.
95a665－6.88a649；cb=24.96a649－7.
32a665。據此即可得到葉綠素a和葉綠素b的濃度(ca、cb：mg/l)，二者之和為總葉綠素的濃度。
最後根據下式可進一步求出植物組織中葉綠素的含量：
葉綠素的含量(mg/g)=[葉綠素的濃度×提取液體積×稀釋倍數]/樣品鮮重(或乾重)。
5樓：匿名使用者
如果按照樓上的人的回答那麼稀釋倍數是2.5，舉個例子就是如果你要講乙個藥品稀釋10倍，那麼你就用這個藥品的體積乘以10，就是你最終體積的總量，你再減去藥品的體積就是你要加水的體積。放在你這個你知道最終體積，你也知道原體積那你就除一下就好了
葉綠素a和 b的含量測定時，在乙個波長不同濃度怎麼計算
6樓：匿名使用者
葉綠素a與葉綠素b含量的測定
實驗目的和意義
葉綠素a與葉綠素b是高等植物葉綠體色素的重要組分，約佔到葉綠體色素總量的75%左右。葉綠素在光合作用中起到吸收光能、傳遞光能的作用(少量的葉綠素a還具有光能轉換的作用)，因此葉綠素的含量與植物的光合速率密切相關，在一定範圍內，光合速率隨葉綠素含量的增加而公升高。另外，葉綠素的含量是植物生長狀態的乙個反映，一些環境因素如乾旱、鹽漬、低溫、大氣汙染、元素缺乏都可以影響葉綠素的含量與組成，並因之影響植物的光合速率。
因此葉綠素含量a與葉綠素b含量的測定對植物的光合生理與逆境生理具有重要意義。
實驗原理
葉綠素提取液中同時含有葉綠素a和葉綠素b，二者的吸收光譜雖有不同，但又存在著明顯的重疊，在不分離葉綠素a和葉綠素b的情況下同時測定葉綠素a和葉綠素b的濃度，可分別測定在663nm和645nm（分別是葉綠素a和葉綠素b在紅光區的吸收峰）的光吸收，然後根據lambert-beer定律，計算出提取液中葉綠素a和葉綠素b的濃度。
a663=82.04ca+9.27cb （1）
a645=16.75ca+45.60cb （2）
公式中ca為葉綠素a的濃度，cb為葉綠素b濃度（單位為g/l），82.04和9.27 分別是葉綠素a和葉綠素b在663nm下的比吸收係數（濃度為1g/l，光路寬度為1cm時的吸光度值）；16.
75和45.60分別是葉綠素a和葉綠素b在645nm下的比吸收係數。即混合液在某一波長下的光吸收等於各組分在此波長下的光吸收之和。
將上式整理，可以得到下式：
ca=0.0127a663-0.00269a645 （3）
cb=0.0229a645-0.00468a663 （4）
將葉綠素的濃度改為mg/l，則上式變為：
ca=12.7a663-2.69a645 （5）
cb=22.9a645-4.68a663 （6）
ct=ca+cb=8.02a663+20.21a645 （7）
ct為葉綠素的總濃度
實驗儀器及材料
實驗材料：
菠菜或其它綠色植物
實驗儀器及試劑：
uv-1700分光光度計；天平；剪刀；打孔器；研缽；移液管；漏斗；量筒；培養皿；濾紙；丙酮；石英砂；caco3；
實驗步驟
提取葉綠素
選取有代表性的菠菜葉片數張，於天平上稱取0.5g，（也可用打孔器打取一定數量的葉圓片，計算總的葉面積），剪碎後置於研體中，加入5ml 80%丙酮，少許caco3和石英砂。仔細研磨成勻漿，用濾鬥過濾到10ml量筒中，注意在研缽中加入少量80%丙酮將研缽洗淨，一併轉入研缽中過濾到量筒內，並定容至10ml。
將量筒內的提取液混勻，用移液管小心抽取5ml轉入25ml量筒中，再加入80%丙酮定容至25ml（最終植物材料與提取液的比例為w：v＝0.5：
50＝1：100，葉色深的植物材料比例要稀釋到1：200）。
測量光吸收
利用722分光光度計或uv1700分光光度計，分別測定葉綠素提取液在645nm和663nm下的吸光度。
結果分析
將測得的數值代入到公式（5）（6）（7）中，計算出葉綠素a、葉綠素b和總葉綠素的濃度。最後要計算出單位葉片鮮重中葉綠素的含量：
葉綠素a含量(mg/g鮮重)＝ca×50ml（總體積數）×1ml/1000ml/l ÷0.5g=0.1ca
葉綠素b含量(mg/g鮮重)＝0.1cb
總葉綠素含量(mg/g鮮重)＝0.1ct
討論：1． 葉綠素在蘭光區的吸收峰高於紅光區的吸收峰，為何不用蘭光區的光吸收來測定葉綠素的含量。
2． 計算葉綠素a與葉綠素b含量的比值，可以得到什麼結論？
3． 比較陽生植物和陰生植物的葉綠素a和葉綠素b的含量以及比例，可以得到什麼結論
葉綠素測定儀測定原理是什麼，葉綠素檢測儀什麼用？
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