1樓：淵源
1）原理：jc-1是一種廣泛用於檢測線粒體膜電位(mitochondrial membrane potential)△ψm 的理想螢光
2樓：百螢生物執事
jc-1樣品分析方案
概述用測試化合物製備細胞
新增jc-1工作溶液（100μl/孔用於96孔板或25μl/孔用於384孔板）在室溫或37℃孵育1小時
讀取 ex / em = 490 / 525nm和490 / 590nm處的螢光強度
注意：以下是我們推薦的活細胞方案。 該方案僅提供指南，實際情況應根據您的具體需求進行修改。
1.準備jc-1工作解決方案：
1.1在高質量無水dmso中製備2至10 mm jc-1的儲備液。 應及時使用原液; 應將任何剩餘的溶液等分並在<-20℃冷凍。
注意：避免反覆凍融迴圈，避免光照。
1.2製備1x jc-1工作溶液：在實驗當天，將jc-1固體溶解在dmso中或將等分試樣的jc-1儲備溶液解凍至室溫。
在hanks和20 mm hepes緩衝液（hhbs）或您選擇的緩衝液（ph 7）和0.02％pluronic®f-127中製備10至30μm1xjc-1工作溶液。 通過votexing很好地混合它們。
注意：jc-1不溶於水，因此它會在溶液中聚集。 建議在將jc-1工作溶液載入到池中之前對其進行過濾。
2.用螢光酶標儀進行jc-1檢測：
2.1用測試化合物細胞培養所需的一段時間（例如，jurkat細胞可以用喜樹鹼處理4-6小時）以誘導細胞凋亡。對於空白孔（沒有細胞的培養基），加入相應量的化合物緩衝液。
2.2將100μl/孔/ 96孔板或25μl/孔/ 384孔板的jc-1工作溶液（來自步驟1.2）加入到細胞板中。
2.3將jc-1裝載板在37℃，5％co2培養箱中培養15-60分鐘。
注意：適當的孵育時間取決於所使用的單個細胞型別和細胞濃度。 優化每個實驗的孵育時間。
2.4從平板上取下jc-1工作溶液，用hhbs或您選擇的緩衝液清洗細胞。 將100μl/孔/ 96孔板或25μl/孔/ 384孔hhbs板加回到細胞板中。
2.5監測ex / em = 490 / 525nm和490 / 590nm處的螢光變化以進行比率分析。
3.用螢光顯微鏡或流式細胞儀進行jc-1測定：
3.1用測試化合物細胞培養所需的一段時間（例如，jurkat細胞可以用喜樹鹼處理4-6小時）以誘導細胞凋亡。
3.2離心細胞，每管取1-5×105個細胞。
3.3在500μljc-1工作溶液中重懸細胞（來自步驟1.2）。
3.4在室溫或37°c下孵育10至30分鐘，避光。
3.5用您選擇的hhbs或緩衝液洗滌細胞。 將細胞重懸於500μlhhbs中以獲得每管1-5×10 5個細胞。
3.6用螢光顯微鏡（使用fitc和tritc濾光片）或流式細胞儀（使用fl1和fl2通道）觀察ex / em = 490 / 525nm和490 / 590nm處的螢光變化。
jc1線粒體膜電位用流式細胞儀怎麼檢測陰性陽性怎麼確定十字門的位置
3樓：匿名使用者
jc1這個染料不應該看單純的紅或者綠色，而是看每個樣本紅綠的比值。
你看這個圖
最後的結果應該是偏紅/偏綠群的比值，而不能用十字gate
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