1樓：匿名使用者
問題有可能如下
bai：
1） 模板du製備有問題。你可以用普通
zhipcr擴增，然後dao電泳確定是不是專模板有問題？
2） 引物問屬題：引物設計的好與否，對realtime 結果至關重要！ 可以用普通pcr確定你的引物擴增效率如何？ 模板可以選取乙個陽性質粒當模板。
3） realtime 體系配置出問題：好好想一下，該加的東西都加了沒？模板、染料、taq酶、等。
並且各個試劑的量一定要確定沒問題！
4） 程式設定：儀器的程式設定，plate的編排、退火溫度、等等。
祝你好運！！！
2樓：匿名使用者
沒有學過，高中化學也很差，所以，不知道！！！
抱歉啊，幫不了你！！！
實時螢光定量pcr之前要不要做個內參基因的篩選
3樓：匿名使用者
通常不需要，因為我們已經很清楚每個內參的屬性。但還需要看你用定量做什麼，比如說做組織表達，或者誘導表達，我們都會偏好於不同的內參。
請問我在做螢光定量pcr的時候內參的ct值很低大約在35左右，而目的基因ct值在25左右 有哪位高手能指點一下
4樓：匿名使用者
你選了個什麼內參，表達量如此之低？感覺有點問題，檢查一下融解曲線對不對。
如果是正確的，說明你的目的基因表達量比內參高出一千倍啊。
ct值越大，表達量越低。
5樓：糟油酒丸
看看你的gapdh引物tm多少，有可能是因為pcr條件適合目的基因引物對而不適合內參引物對嗎？
我是螢光定量pcr初學者，現在想做定量試驗，最近做了個標準曲線，可是內參和目的基因的點都不**上。
6樓：水行船
可以78℃讀板，這樣ct值就只是產物的值了，另外你的ntc可能是汙染了，稀釋的過程中也要防止汙染，尤其是標準品，
7樓：匿名使用者
從溶解曲線上看，確實有非特異性的擴增，在75度左右的小峰。樣本的濃度越低，這個非特異的干擾就越大。最好不要用sybr green做。改用探針吧
8樓：匿名使用者
qpcr手抖一下就好幾倍的差別甩出去的 啥樣的結果都挺正常 多做幾次取個最穩定的結果就行了
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