1樓：匿名使用者
⒈選擇適當的細胞接種濃度。一般情況下，96孔培養板的一內貼壁細胞長滿時約有105個細胞。但由於不同細胞貼壁後面積差異很大，因此，在進行mtt試驗前，要進行預實驗檢測其貼壁率、倍增時間以及不同接種細胞數條件下的生長曲線，確定試驗中每孔的接種細胞數和培養時間，以保證培養終止致細胞過滿。
這樣，才能保證mtt結晶形成數量與細胞數呈的線性關係。否則細胞數太多敏感性降低，太少觀察不到差異。
⒉藥物濃度的設定。一定要多看文獻，參考別人的結果再定個比較大的範圍先初篩。根據自己初篩的結果縮小濃度和時間範圍再細篩。
切記！否則，可能你用的時間和濃度根本不是藥物的有效濃度和時間。
⒊ 時間點的設定。在不同時間點的測定od值，輸入excel表，最後得到不同時間點的抑制率變化情況，畫出變化的曲線，曲線什麼時候變得平坦了（到了平台期）那個時間點應該就是最好的時間點（因為這個時候的細胞增殖抑制表現的最明顯）。
⒋培養時間。200ul的培養液對於10的4～5次方的增殖期細胞來說，很難維持68h，如果營養不夠的話，細胞會由增殖期漸漸趨向g0期而趨於靜止，影響結果，我們是在48h換液的。
⒌mtt法只能測定細胞相對數和相對活力，不能測定細胞絕對數。做mtt時，盡量無菌操作，因為細菌也可以導致mtt比色od值的公升高。
⒍理論未必都是對的。要根據自己的實際情況調整。
⒎實驗時應設定調零孔，對照孔，加藥孔。調零孔加培養基、mtt、二甲基亞碸。對照孔和加藥孔都要加細胞、培養液、mtt、二甲基亞碸，不同的是對照孔加溶解藥物的介質，而加藥組加入不同濃度的藥物。
⒏避免血清干擾。用含15%胎牛血清培養液培養細胞時，高的血清物質會影響試驗孔的光吸收值。由於試驗本底增加，會試驗敏感性。
因此，一般選小於10%胎牛血清的培養液進行。在呈色後，盡量吸淨培養孔內殘餘培養液。 mtt 溶液的配製方法
通常，此法中的mtt 濃度為5mg/ml。因此，可以稱取mtt 0.5克，溶於100 ml的磷酸緩衝液（pbs）或無酚紅的培養基中，用0.
22μm濾膜過濾以除去溶液裡的細菌，放4℃ 避光儲存即可。在配製和儲存的過程中，容器最好用鋁箔紙包住。
需要注意的是，mtt法只能用來檢測細胞相對數和相對活力，但不能測定細胞絕對數。在用酶標儀檢測結果的時候，為了保證實驗結果的線性，mtt 吸光度最好在0-0.7 範圍內。
mtt一般最好現用現配，過濾後4℃避光儲存兩周內有效，或配製成5mg/ml儲存在-20度長期儲存，避免反覆凍融，最好小劑量分裝，用避光袋或是黑紙、錫箔紙包住避光以免分解。我一般都把mtt粉分裝在ep管裡，用的時候現配，直接往培養板中加，沒必要一下子配那麼多，尤其當mtt變為灰綠色時就絕對不能再用了。
mtt有致癌性，用的時候小心，有條件最好帶那種透明的簿膜手套.配成的mtt需要無菌，mtt對菌很敏感；往96孔板加時不避光也沒有關係，畢竟時間較短，或者你不放心的時候可以把操作台上的照明燈關掉.
配製mtt時用用pbs溶解，也有人用生理鹽水配，60℃水浴助溶。
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