1樓：沙古利費斯
不用，基因匯入載體時才要篩選。
2樓：刀劍信譽
基因工程的基本操作程式：
1、目的基因的獲取
（1）目的基因是指： 編碼蛋白質的結構基因。
（2）獲取方法：①從基因文庫中獲取；②人工合成（反轉錄法和化學合成法）；③pcr技術擴增目的基因。
2、基因表達載體的構建
（1）目的：使目的基因在受體細胞中穩定存在，並且可以遺傳至下一代，使目的基因能夠表達和發揮作用。
（2）組成：目的基因+啟動子+終止子+標記基因。如圖：
①啟動子：是一段有特殊結構的dn**段，位於基因的首端，是rna聚合酶識別和結合的部位，能驅動基因轉錄出mrna，最終獲得所需的蛋白質。
②終止子：也是一段有特殊結構的dn**段，位於基因的尾端。
③標記基因的作用：是為了鑑定受體細胞中是否含有目的基因，從而將含有目的基因的細胞篩選出來。常用的標記基因是抗生素基因。
（3）基因表達載體的構建過程：
3、將目的基因匯入受體細胞
（1）轉化的概念：是目的基因進入受體細胞內，並且在受體細胞內維持穩定和表達的過程。
（2）常用的轉化方法：
生物種類 植物細胞 動物細胞 微生物細胞
常用方法 農桿菌轉化法 顯微注射技術 ca2+處理法
受體細胞 體細胞 受精卵 原核細胞
轉化過程 將目的基因插入到ti質粒的t-dna上→農桿菌→匯入植物細胞→整合到受體細胞的dna→表達 將含有目的基因的表達載體提純→取卵（受精卵）→顯微注射→受精卵發育→獲得具有新性狀的動物 ca2+處理細胞→感受態細胞→重組表達載體與感受態細胞混合→感受態細胞吸收dna分子
（3）重組細胞匯入受體細胞後，篩選含有基因表達載體受體細胞的依據是標記基因是否表達。
4、目的基因的檢測和表達
（1）首先要檢測轉基因生物的染色體dna上是否插入了目的基因，方法是採用dna分子雜交技術。
（2）其次還要檢測目的基因是否轉錄出mrna，方法是用標記的目的基因作探針與mrna雜交。
（3）最後檢測目的基因是否翻譯成蛋白質，方法是從轉基因生物中提取蛋白質，用相應的抗體進行抗原--抗體雜交。
（4）有時還需進行個體生物學水平的鑑定。如轉基因抗蟲植物是否出現抗蟲性狀。
知識點撥：
1、構建基因文庫的目的為了在不知目的基因序列的情況下，便於獲得所需的目的基因。
2、pcr技術：是一項在生物體外複製特定dn**段的核酸合成技術。pcr擴增是獲取目的基岡的一種非常有用的方法，也是進行分子鑑定和檢測的一種很靈敏的方法。
目的：通過指數式擴增獲取大量的目的基因。
3、基因文庫中不是直接保管相應基因，基因文庫中的基因儲存在受體菌中。
4、在基因工程的四個操作步驟中，只有第三步將目的基因匯入受體細胞不需鹼基互補配對，其餘三個步驟都涉及鹼基互補配對。
5、原核生物繁殖快、多為單細胞、遺傳物質相對較少，有利於目的基因的複製與表達，因此常用大腸桿菌等原核生物作為受俸細胞。
6、植物細胞的全能性較高，可經植物組織培養過程成為完整植物體，因此受體細胞可以是受精卵也可以是體細胞；動物基因工程中的受體細胞一般是受精卵。
7、轉化的實質是目的基因整合到受體細胞染色體基因組中，從而使受體生物獲得了新的遺傳特性的現象，從其變化的實質看，這種變異屬於可遺傳變異中的基因重組。
知識拓展：
1、基因文庫的構建：
（1）概念
①基因組文庫：含有一種生物的全部基因。將含有某種生物不同基因的許多dn**段，匯入受體菌的群體中儲存，各個受體菌分別含有這種生物的不同的基因，稱為基因組文庫。
②cdna文庫：只包含了一種生物的部分基因。
（2）構建過程
基因組文庫的構建 cdna文庫的構建
2、人工合成目的基因
（1）反轉錄法：
（2）人工合成目的基因
3、pcr技術擴增目的基因
①原理：dna雙鏈複製
②過程：
第一步：加熱至90～95℃dna解鏈；
第二步：冷卻到55～60℃，引物結合到互補dna鏈；
第三步：加熱至70～75℃，熱穩定dna聚合酶從引物起始互補鏈的合成。
基因工程操作步驟，將載體匯入受體細胞之後，目的基因是怎麼複製的？引物是幹什麼的？
3樓：東晶
目的基因是通過bai
限制性du內切酶的作用連線在zhi
載體上的，並且不dao影響載體的功能，而載體是版一種質粒或是權
噬菌體，在細菌（如大腸桿菌）中有自主複製功能，這樣你的目的基因就複製且表達啦。引物當然是用來擴增目的基因片段的啊！多看看書
吳乃虎的，基因工程
4樓：匿名使用者
目的複基因隨著制載體的複製而復bai制。du
引物是pcr過程中的zhi新增物，詳見dao
5樓：匿名使用者
目的基因整合到受體細胞中，隨受體細胞的dna複製而複製。
引物是一段短的單內
鏈rna或dn**段，可結合
容在核酸鏈上與之互補的區域，其功能是作為核苷酸聚合作用的起始點，核酸聚合酶可由其3′端開始合成新的核酸鏈。
高中生物：基因工程的知識點有什麼？
6樓：匿名使用者
我這裡的是一個**格式的 插入失敗啊 你把郵箱給我我發給你
為什麼把目的基因匯入受體細胞要用載體？
7樓：魚骨頭愛游泳
要考慮目的基因在細胞中表達，直接匯入目的基因無法表達，沒有表達即轉錄相關的原件，而載體具有！
8樓：123來不及
細胞中外來的dna一般都會被降解掉，而且，就算進到細胞中，還要能複製，能表達才行。載體是自然條件下可以進入細胞，並且能夠複製和表達的dna，所以必需要藉助載體才能進入受體細胞。
pcr只能擴增基因片段，並不能表達，目前還沒有脫離細胞進行的表達過程。
9樓：靜軒散人
首先pcr利用的是dna在不同溫度下的變性和復性，與在細胞中的複製是不一樣的。
*************************===就像你說的，用到質粒的原因實際上就是啟動子，終止子，複製原點和標記基因，如果目的基因上有了他們很可能就不用質粒了，可是目的基因上可能有這些東西都有嗎？
事實上質粒上的啟動子和終止子也是後來做上去的，因為它需要適合受體細胞，能讓受體細胞識別。
10樓：匿名使用者
對的，不一定需要載體。
只要你p出來的片段是完整的，外界條件適當，啟動子響應，啟動子下游的目的基因(orf)就有機會轉錄表達出來。(pcr-->切膠**-->轉化-->篩選) （注意是有機會！機會是否比載體匯入的大，不一定。
）通過載體匯入的好處，一是量產；二是有篩選基因方便挑選transformants；三是方便下游的鑑別。
11樓：匿名使用者
遊離的dna進入細胞體,一般會直接被分解,就算可以進行轉錄——翻譯成蛋白,遊離dna也無法跟著細胞**進行復制,導致子代細胞中不再含有目的基因,也就是說,你費力將基因匯入受體細胞,結果只有一個細胞被改變了,整個群體細胞菌落不會有可觀察的任何變化.
而將基因接入載體,由於載體可以在細胞內複製,隨著細胞**,載體會帶著目的基因存在於每個子代細胞中,最終整個菌落髮生可以觀察到的變化,基因工程才有意義.
基因工程是一個巨集觀提取——微觀改造——巨集觀檢驗的過程,就是依靠各種載體實現的
病毒作為載體是如何攜帶目的基因進入受體細胞
迄今已bai經定位的 噬菌 du體的基因至少有61個,其中有一zhi半左右參與dao了噬菌體生命週期的回活動,這些基因所答在區段是噬菌體生長繁殖所必需的,在表達載體構建中為不可替代區 而另一部分基因對於噬菌體生長週期不是必需的,這些基因所在區域就稱為可替代區,如果用外源基因取代之後,並不影響噬菌體的...
基因工程構建基因表達載體用到質粒的原因
質粒幫助運輸目的基因進入受體細胞 質粒是包含有dna的,這樣就可以成為載體,另外由於質粒本身就屬於胞器,與原細胞融合度非常高,所以適合作為基因表達載體。可載性 融合度高。基因工程構建基因表達載體的問題 我估計這個構建是利用你提到的酶切位點在你所說的 特定啟動子 和 終止子 之間插入目的基因,這樣一來...
質粒作為基因工程常用載體必須具備的條件
三個條件 1 能在宿主細胞內複製並穩定儲存 2.具有多個限制酶切位點 方便剪下 3.具有標記基因 有利於檢測 轉殖載體 轉殖位點，複製子，標記基因 表達載體 啟動子，終止子，多轉殖位點，複製子，標記基因 在宿主細胞內較穩定，能複製便於篩選 方便進行插入，剪下等基因操作 最基本的，要有足夠大的拷貝數 ...