細胞可不可以固定後放置一段時間再做免疫螢光

2021-03-11 05:54:06 字數 880 閱讀 5984

1樓:匿名使用者

這個沒有絕bai

對的。取決於你的試du驗方法和zhi目的。一般來說,固dao定後,把樣本再轉移回到儲存液中,可以大答大延長儲存的時間。

為了保護抗原表位,建議你使用新鮮配置的多聚甲醛來固定。固定後立刻轉移到5%bsa的pbs溶液中(最好放防腐劑),可以在4度儲存一段時間。

當然,樣本長時間儲存,肯定對結果會有不好影響。至於影響的大小,你要做乙個時間曲線來證明。以後就心中有數了。

還有一點要注意的是,抗體對抗原表位的識別。有些抗體只能識別未固定的表位,有些可以識別固定後的,有些只能識別變性的肽鏈。購買的時候也要特別注意。

2樓:111尚屬首次

應該是不行的,流式一般是先抗體標記,再固定的。先用甲醛固定會影響蛋白構形,內改變抗原決定簇的三

容維構型,影響蛋白與抗體的結合,造成假陰性結果。

最好不要這樣,我們實驗室做流式沒有提前用甲醛固定過,都是收集細胞後馬上做流式。細胞如果長密了你可以凍存或者傳代,等抗體來了再做流式。

3樓:蛙家居

這個沒有絕對的.取決於你的試驗方法和目的.一般來說,固定後,把樣本再轉移到儲存專液中,可以屬大大延長儲存的時間.

為了保護抗原表位,建議你使用新鮮配置的多聚甲醛來固定.固定後立刻轉移到5%bsa的pbs溶液中(最好放防腐劑),可以在4度儲存一段時間.

當然,樣本長時間儲存,肯定對結果會有不好影響.至於影響的大小,你要做乙個時間曲線來證明.以後就心中有數了.

細胞固定不好以及免疫螢光背景強怎麼辦

4樓:匿名使用者

補充:一抗用的abcam的,1:200稀釋;

二抗用的國產的中杉金橋的,1:50稀釋的。

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