1樓：匿名使用者
先找到目的基因，設計引物，pcr，構建轉殖及表達載體，轉入大腸桿菌做原核蛋白表達
如果大小正確 ，可以轉入宿主真菌做真核表達
2樓：匿名使用者
1、首先選擇高拷bai
貝的du質粒載體；
2、將目的基因zhi進行改造，盡量dao避免工程專菌的稀有密碼子屬，在表達質粒之前設定高效的啟動子；
3、鏈結載體與目的基因
4、匯入所選擇的工程菌，進行培養
5、檢測表達量
如果還是太低，你就要看看是否存在抑制物或負調控等
3樓：初夏之橙
你想讓基因在**表達呢？可以換個載體，用溫度或iptg誘導。
4樓：無聊的小小寶
樓主的問題bai
問的太寬泛了。請問你du是具體問題出在哪zhi裡呢？
你可以利dao用biomart這個工具（內
），找到種間的orthlogue關係以及各種容型別的注釋id直接的對應關係。你也可以用ncbi裡面的homologene資料庫去找種間的同源序列.
multiple alignment可以用clust w或者mega做。
系統發育樹可以用mega做。phylip好像也可以。
基因結構上可以做做gc含量，外顯子大小，splicing，調控序列什麼的
蛋白結構**軟體很多，不過我沒做過。
ncbi有乙個conserved domain 的資料庫，你可以和他比較下，分析下結構域。
表達情況。。。。你可以找找相關的est（ncbi）或者array（。。這個不記得了，在ncbi上應該有別人的資料）的表達資料。
基因超表達的詳細步驟，一定要詳細呀！
5樓：匿名使用者
什麼物種？
如果是細菌的話： 構建表達載體， 轉化細菌， 篩選陽性轉殖， 進一步分析之類
如何檢測目的基因是否表達，要步驟的
6樓：匿名使用者
蛋白質水平:抗原抗體雜交
分子水平:抗蟲抗病接種實驗
---jan
7樓：匿名使用者
反轉錄法：
1、培養目的基因所在生物細胞一定的時間。
2、用試劑盒或者傳統的trizol法獲取mrna。
3、配置rt-pcr反應體系，反轉錄生成cdna。
4、使用目的基因涉及的引物對cdna進行pcr反應。同時設定對照組使用持家基因的引物pcr。（驗證mrna的成功提取和cdna的成功得到）
5、瓊脂糖凝膠電泳，若有目的條帶，則說明表達了。
設計構建乙個載體，將目的基因在植物根系表達並向根細胞外分泌。請詳細寫出個步驟
如何構建乙個基因的過表達載體
8樓：風翼殘念
當拿到乙個基因的dn**段後，就需要把它匯入乙個載體，一方面長期儲存。另一方面也需要以載體為媒介將基因匯入受體細胞中。基因表達載體的構建是基因工程的核心。
常用的載體有細菌質粒，噬菌體和動植物病毒。其中質粒載體最常用。所謂載就是乙個很長的環狀dna，攜帶一些基因，可以匯入細菌中自我複製，也可以從細菌中提取出來改造。
現在我們就需要把sun片段連到乙個載體，用vectornti開啟，研究一下用哪個酶處理，這個載體需要用sma1這個酶切開，然後用sun連上，替換切下來的ccdb，這裡要用到兩個酶，乙個sma1限制性內切酶切開，乙個dna連線酶把新片段連上，植物轉基因載體和這些酶都是非常常用的試劑。
載體構建好之後需要把它們匯入大腸桿菌中複製，這裡就要用到大腸桿菌的感受態了，十把構建好的載體和感受態混合，然後放到42度熱水處理個1分鐘，再冰上放個3分鐘。
這時需要一些培養細菌的培養基來培養菌們，大腸桿菌這種菌很好養活，唯一需要注意的是，滅菌過後的培養基要小心儲存。把在冰上處理過的大腸桿菌放到培養基中培養一天，為了防止沒有轉入載體的菌也混進來，我們在載體上加入了乙個抵抗抗生素的基因。
這樣我們在培養基中加入這種抗生素，在裡面就只有需要的大腸桿菌能生長了。最後得到了上億個攜帶著含有我們的sun基因的載體的大腸桿菌，這時就需要把質粒再提出來。
實驗室裡提質粒需要用專門的試劑盒，也可以簡化一下，先把菌液離心讓菌沉澱，然後再用水把菌打散，然後煮沸1分鐘再離心，取上清，上清中加乙醇讓dna析出，再離心讓dna沉澱，最後用水把dna溶解。這樣提出來的dna會有很多雜質以及細菌的基因組dna。
9樓：匿名使用者
用限制酶分別切割目的基因兩側及運載體，然後在dna連線酶的作用下就形成了基因表達載體。
10樓：紫耀星之軌跡
首先要用一定的限制酶切割質粒，使質粒出現乙個缺口，露出黏性末端。然後用同
一種限制酶切斷目的基因，使其產生相同的黏性末端（部分限制性內切酶可切割出平末端，擁有相同效果）。將切下的目的基因的片段插入質粒的切口處，首先鹼基互補配對結合，兩個黏性末端吻合在一起，鹼基之間形成氫鍵，再加入適量dna連線酶，催化兩條dna鏈之間形成磷酸二酯鍵，從而將相鄰的脫氧核糖核酸連線起來，形成乙個重組dna分子。如人的胰島素基因就是通過這種方法與大腸桿菌中的質粒dna分子結合，形成重組dna分子（也叫重組質粒）的。
如何設計構建乙個載體，將目的基因在植物根系表達並向根細胞外分泌？
基因表達載體就是已插入目的基因的載體
如果空泛來講是對的,準確來說是錯的,畢竟表達載體不僅僅是目的基因,還有啟動子,終止子,標記基因。基因表達載體的構建與將目的基因匯入受體細胞的區別?15 基因表達載體是一種東西,通常是大腸桿菌,土壤融桿菌等細菌中的dna質粒專,這些質粒作為載體通屬過dna連線酶與目的基因結合。目的基因匯入受體細胞則是...
想測試基因的MRNA表達量，用什麼方法最好？如果是原位雜
對於基因蛋白表達的定量一般不會用到原位雜交和免疫組化，這兩個方法的優點是更加直觀，但定量困難，適合用作定性實驗。個人認為定量實驗檢測最好用rt pcr進行核酸層面的檢測，或者用免疫學方法直接檢測蛋白量，比如elisa等 蛋白電泳 包括2d 可以進行半定量的實驗。另外定量實驗要注意的是選擇合適的內參，...
補充句子，使句子表達的意思更具體。1 他忽然想到2 星星變成了3像（）一樣
1.他是乙個人 2.都敏俊 3.幸福 花兒 照樣子，把句子補充完整，使表達更具體。例 昆明湖靜得像一面鏡子。1 屋裡熱得像 一樣，人 1 悶鍋 2 無數雙眼睛 3 熱鍋上的螞蟻一樣 4 鉗子 答案不唯一 把下列句子補充完整，使句子更深動。1 九寨溝的水真清啊，清得像神麼。2 天空中的星星什麼。1 九...