1樓：匿名使用者
核酸、核苷酸及其衍生物的分子結構中的嘌呤、嘧啶鹼基具有共軛雙健系統（－c＝c一c＝c 一），能夠強烈吸收250~280nm 波長的紫外光。核酸（dna，rna）的最大紫外吸收值在260nm 處。遵照lambert-beer 定律，可以從紫外光吸收值的變化來測定核酸物質的含量。
在不同ph 溶液中嘌呤、嘧啶鹼基互變異構的情況不同，紫外吸收光也隨之表現出明顯的差異，它們的摩爾消光係數也隨之不同。所以，在測定核酸物質時均應在固定的ph溶液中進行。
核酸的摩爾消光係數（或吸收係數），通常以ε（ρ）來表示，即每升含有一摩爾核酸磷的溶液在260nm 波長處的消光值（即光密度，或稱為光吸收）。核酸的摩爾消光係數不是一個常數，而是依賴於材料的前處理、溶液的ph 和離子強度發生變化。它們的經典數值（ph = 7.
0）如下：
dna 的ε（ρ）= 6 000 ~ 8 000
rna 的ε（ρ）= 7 000 ~ 10 000
小牛胸腺dna 鈉鹽溶液（ph = 7.0）的ε（ρ）= 6 600，dna 的含磷量為9.2%，含1μg/ml dna 鈉鹽的溶液光密度為0.
020。rna 溶液（ph = 7.0）的ε（ρ）= 7 700~7 800，rna 的含磷量為9.
5%，含1μg /ml rna 溶液的光密度為0.022~0.024。
採用紫外分光光度法測定核酸含量時，通常規定：在260nm 波長下，濃度為1μg/ml 的 dna 溶液其光密度為0.020，而濃度為1μg/ml 的rna 溶液其光密度為0.
024。因此，測定未知濃度的dna （rna）溶液的光密度od260nm，即可計算測出其中核酸的含量。該法簡單、快速、靈敏度高，如核酸3μg／ml 的含量即可測出。
對於含有微量蛋白質和核苷酸等吸收紫外光物質的核酸樣品，測定誤差較小，若樣品內混雜有大量的上述吸收紫外光物質，測定誤差較大，應設法事先除去。
由於降解或水解作用，核酸的光密度可以增高約40％，這就是眾所周知的增色效應（hyperchromic effect）。在大分子的核酸中，氫鍵和π-鍵相互作用改變了鹼基的共振行為。因此，核酸的光密度低於構成它的核苷酸的光密度，該現象稱為減色效應（hypochromic effect）。
2樓：羽動一生
在一定範圍內，核酸溶液的吸光度與其濃度成正比。
3樓：匿名使用者
樓上說得夠清楚了，我想無需補充。
核酸含量的測定 紫外吸收法的原理是什麼？
4樓：匿名使用者
核苷、核苷酸、核酸的組成成分中都有嘌呤內、嘧啶鹼基容，這些鹼基都具有共軛雙鍵 （ -c-c=c-c=c-），在紫外光區的250-280nm處有強烈的光吸收作用，最大吸收值在260nm左右。常利用核酸的紫外吸收性進行核酸的定量測定。
核酸的摩爾消光係數ε(p)表示為每升溶液中含有1摩爾原子磷的光吸收值。rna的ε(p)260nm（ph7.0）為7 700～7 800，rna的含磷量約9.
5%，因此每毫升溶液含1μg rna的光吸收值相當於0.022～0.024。
小牛胸腺dna鈉鹽的ε(p) 260nm（ph7.0）為6 600，含磷量為9.2%，因此每毫升溶液含1μg dna鈉鹽的光吸收值相當於0.
020。
5樓：匿名使用者
蛋白質也有紫外吸收復，通制常蛋白質的吸收高峰在280nm波長bai處，在260nm處的吸收du值僅為核酸的zhi1/10或更低，因此對於含有微量dao蛋白質的核酸樣品，測定誤差較小。若待測的核酸製品中混有大量的具有紫外吸收的雜質，則測定誤差較大，應設法除去。不純的樣品不能用紫外吸收值作定量測定。
從a260/ a280的比值可判斷樣品的純度。純rna的a260/ a280≥2.0；dna的a260/ a280≥1.
8。當樣品中蛋白質含量較高時，則比值下降。rna和dna的比值分別低於2.
0和1.8時，表示此樣品不純。
生物幫上面有這方面的詳細介紹， 生物問答 http://www.zhibio.com/
採用紫外光吸收法測定樣品的核酸含量有何優缺點
6樓：
用紫外光吸收法測定樣品的核酸含量，具有簡單、快速、靈敏度高的優點，並且待測核酸樣品中含有的微量蛋白質和核苷酸等吸收紫外光物質，產生較小測定誤差。 但該法在測定樣品內混雜有大量的上述吸收紫外光物質時，則會產生較大測定誤差，需要設法事先除去。
核酸含量的測定方法及原理都有哪些？
7樓：望歌郗曼雲
核酸定量常用方法及原理如下：
1、光吸收法：核酸中鹼基共軛結構在近紫外光波長260nm處有最大吸收，吸收強度與核酸濃度成正比，因此可以用於核酸定量。
2、定p法：核酸中p含量約為9.5%，因此可以通過測定樣品中的有機p量來進行核酸定量。
核酸是由許多核苷酸聚合成的生物大分子化合物，為生命的最基本物質之一。
核酸廣泛存在於所有動植物細胞、微生物體內，生物體內的核酸常與蛋白質結合形成核蛋白。不同的核酸，其化學組成、核苷酸排列順序等不同。根據化學組成不同，核酸可分為核糖核酸（簡稱rna）和脫氧核糖核酸（簡稱dna）。
核酸含量的測定方法及原理都有哪些
8樓：
核酸定量常用方法如下：
① 光吸收法：核酸中鹼基共軛結
構在近紫外光波長260nm處有最大版吸收,吸收強度與核酸濃度權成正比,因此可以用於核酸定量.
② 定p法：核酸中p含量約為9.5%,因此可以通過測定樣品中的有機p量來進行核酸定量.
③ 核糖含量測定法：包括rna的地衣酚法及dna的二苯胺法.
④ 定量pcr法：定量pcr技術是指以外參或內參為標準,通過對pcr終產物的分析或pcr過程的監測,進行pcr起始模板量的定量.
⑤ 核酸雜交半定量法：通過探針與核酸在膜上雜交顯色,與標準品顯色進行比較從而進行半定量.
如何用紫外吸收法測定dna含量
9樓：匿名使用者
首先，分光光度計測量的樣品必須是均一的，搖勻後再測量結果會準確些。它是利用分光光度法對物質進行定量定性分析的儀器。
核酸的定量是分光光度計使用頻率最高的功能。可以定量溶於緩衝液的寡核苷酸，單鏈、雙鏈dna，以及rna。核酸的最高吸收峰的吸收波長260 nm。
每種核酸的分子構成不一，因此其換算係數不同。定量不同型別的核酸，事先要選擇對應的係數。如:
1od 的吸光值分別相當於50μg/ml的dsdna，37μg/ml的ssdna，40μg/ml的rna，30μg/ml的olig。測試後的吸光值經過上述係數的換算，從而得出相應的樣品濃度。測試前，選擇正確的程式，輸入原液和稀釋液的體積，爾後測試空白液和樣品液。
然而，實驗並非一帆風順。讀數不穩定可能是實驗者最頭痛的問題。靈敏度越高的儀器，表現出的吸光值漂移越大。
事實上，分光光度計的設計原理和工作原理，允許吸光值在一定範圍內變化，即儀器有一定的準確度和精確度。如eppendorf biophotometer的準確度≤1.0%(1a)。
這樣多次測試的結果在均值1.0%左右之間變動，都是正常的。另外，還需考慮核酸本身物化性質和溶解核酸的緩衝液的ph值，離子濃度等:
在測試時，離子濃度太高，也會導致讀數漂移，因此建議使用ph值一定、離子濃度較低的緩衝液，如te，可大大穩定讀數。樣品的稀釋濃度同樣是不可忽視的因素:由於樣品中不可避免存在一些細小的顆粒，尤其是核酸樣品。
這些小顆粒的存在干擾測試效果。為了最大程度減少顆粒對測試結果的影響，要求核酸吸光值至少大於0.1a，吸光值最好在0.
1-1.5a。在此範圍內，顆粒的干擾相對較小，結果穩定。
從而意味著樣品的濃度不能過低，或者過高(超過光度計的測試範圍)。最後是操作因素，如混合要充分，否則吸光值太低，甚至出現負值;混合液不能存在氣泡，空白液無懸浮物，否則讀數漂移劇烈;必須使用相同的比色杯測試空白液和樣品，否則濃度差異太大;換算係數和樣品濃度單位選擇一致;不能採用視窗磨損的比色杯;樣品的體積必須達到比色杯要求的最小體積等多個操作事項。
除了核酸濃度，分光光度計同時顯示幾個非常重要的比值表示樣品的純度，如a260/a280的比值，用於評估樣品的純度，因為蛋白的吸收峰是280nm。純淨的樣品，比值大於1.8(dna)或者2.
0(rna)。如果比值低於1.8 或者2.
0，表示存在蛋白質或者酚類物質的影響。a230表示樣品中存在一些汙染物，如碳水化合物，多肽，苯酚等，較純淨的核酸a260/a230的比值大於2.0。
a320檢測溶液的混濁度和其他干擾因子。純樣品，a320一般是0。
分光光度計的重要配件-- 比色杯
比色杯按照材質大致分為石英杯、玻璃杯以及塑料杯。根據不同的測量體積，有比色杯和毛細比色杯等。一般測試核酸和紫外定量蛋白，均採用石英杯或者玻璃杯，但是不適合比色法測定。
因為反應中的染料(如考馬斯亮蘭)能讓石英和玻璃著色，所以必須採用一次性的塑料杯。而塑料杯一般不適合用於在紫外範圍內測試樣品。
由於另外測試的樣品量不同，所以一般分光光度計廠家提供不同容積的比色杯以滿足使用者不同的需求。目前市場已經存在一種既可用於核酸、紫外蛋白質定量，亦可用於蛋白比色法測定的塑料杯，樣品用量僅需50μl，比色杯單個無菌包裝，可以**樣品。如eppendorf uvette®塑料比色杯，是目前比色杯市場上一個革新。
隨著生命科學以及相關學科發展，對此類科學的實驗研究提出更高的要求，分光光度計將是分子生物學實驗室不可缺少的儀器，也成為微生物、食品、製藥等相關實驗室的必備裝置之一。
當然， 隨著科技的發展，現在比色杯已經不是使用分光光度計時的必備物品。目前國外nanodrop公司(現已被thermo fisher公司收購)生產的nd1000分光光度計與舊式分光光度計相比，已經可以做到無需稀釋樣品，無需使用比色杯，每次測量僅需1-2μl樣品即可完成測量
核酸含量的測定方法及原理都有哪些
望歌郗曼雲 核酸定量常用方法及原理如下 1 光吸收法 核酸中鹼基共軛結構在近紫外光波長260nm處有最大吸收，吸收強度與核酸濃度成正比，因此可以用於核酸定量。2 定p法 核酸中p含量約為9.5 因此可以通過測定樣品中的有機p量來進行核酸定量。核酸是由許多核苷酸聚合成的生物大分子化合物，為生命的最基本...
測定核酸含量的方法有哪些
hero丶 核酸中的有抄機無機磷酸 無機磷 bai酸 鉬酸du 磷鉬酸 還原劑 抗壞血酸等zhi 鉬蘭 鉬蘭的dao最大吸收波長在660nm,在一定濃度範圍內,溶液的吸收值與無機磷的含量成正比。該法測得的是總磷量,需減去無機磷的含量才是核酸的含磷量。二 定糖法 核酸中的戊糖可在濃鹽酸或濃硫酸作用下脫...
有幾種方法測定葡萄糖含量？各自的原理是什麼
有兩種方法來測定。第一種用菲林試劑來測定，原理為 ch2oh choh 4cho 2 ag nh3 2oh 水浴加熱 ch2oh choh 4coonh4 2ag 3nh3 h2o 注意事項 e69da5e6ba9062616964757a686964616f31333361323632 試管內壁必...