簡述定量pcr的原理和過程
1樓：世玉枝裘婷
半定量反轉錄－聚合酶鏈反應（semi-quantitative
reverse
transcription
andpolymerase
chainreaction
sqrt-pcr）是近年來常用的一種簡捷、特異的定量rna測定方法，通過mrna反轉錄成cdna，再進行pcr擴增，並測定pcr產物的數量，可以推測樣品中特異mrna的相對數量。以半定量rt-pcr為基礎建立起來的mrna含量測定技術，較含內標化的rt-pcr定量測定的mrna的方法更為簡便可行。
這種方法不另設『內標準',排除了倆對不同引物之間的相互抑制和靈敏讀差異，而且具有明顯的劑量－效益關係和良好的重複性。
步驟：1.抽提rna，2.反轉錄獲得cdna，3.以cdna為模板做pcr
注意：步驟1，rna抽提質量一定要好，注意汙染。內參的選擇，常用的有βactin和gapdh倆中。
步驟3，半定量rt-pcr應該再兩管中進行，既內參和目的基因各一管，這樣便於控制，做圖的時候可以放在一各泳道里跑！指數期和平臺期一定要摸清楚！
2樓：井永芬暴茶
原理1;在含有插入性染料或特異性探針的體系中擴增目標序列。
2光學系統激發並檢測報告螢光。
3報告螢光的強度與所擴增dna的量呈比例關係過程和普通pcr差不多，不過引物設計比較複雜，使用的儀器也不一樣，在對數期檢測。
3樓：管景明樸賦
過程其實和普通pcr一樣，只是定量一般會加螢光染料（或螢光探針），整個過程是被儀器監控的所以能夠即時的知道擴增的進度。最後根據標準曲線來定量的。
何為pcr,說明其原理及其應用
4樓：白露飲塵霜
聚合酶鏈反應(polymerase chain reaction ,pcr)是80年代中期發展起來的體外核酸擴增技術。
pcr技術的基本原理 類似於dna的 天然複製過程，其特異性依賴於與靶序列兩端互補的寡核苷酸引物。pcr由變性--退火--延伸三個基本反應步驟構成：①模板dna的變性：
模板dna經加 熱至93℃左右一定時間後，使模板dna雙鏈或經pcr擴增形成的雙鏈dna解離，使之成為單鏈，以便它與引物結合，為下輪反應作準備；②模板dna與引 物的退火(復性)：模板dna經加熱變性成單鏈後，溫度降至55℃左右，引物與模板dna單鏈的互補序列配對結合；③引物的延伸：dna模板--引物結合 物在taqdna聚合酶的作用下，以dntp為反應原料，靶序列為模板，按鹼基配對與半保留複製原理，合成一條新的與模板dna 鏈互補的半保留複製鏈重複迴圈變性--退火--延伸三過程，就可獲得更多的「半保留複製鏈」,而且這種新鏈又可成為下次迴圈的模板。
每完成乙個迴圈需 4分鐘，3小時就能將待擴目的基因擴增放大幾百萬倍。到達平臺期(plateau)所需迴圈次數取決於樣品中模板的拷貝。
定點誘變：設計引物時對引物進行修改，使其在某些位點上與擴增模板不相配對，但是又不影響引物與模板的退火，這種引物擴增後的到的產物就是在這些不配對區發生了定點突變。
分子標記的鑑別：rapd擴增的片斷是引物之間的區域，不同個體引物之間的序列長度不同，可以作為物種或個體的一種標記，這是分子水平的標記，也稱分子標記。
基因轉殖：反向pcr.
pcr的反應體系要具有以下條件：
5樓：閒風自適
pcr的反應體系櫻做要具有以下條件：
a.被分離的目的基因兩條鏈各一端序列相互補的dna引物。
c.作做祥為模板的目的dna序列。
d.具有熱穩定性的dna聚合酶。
正脊胡衡確答案：abcd
簡述pcr的基本原理
6樓：張三**
基本原理：pcr技術的基本原理類似於dna的天然複製過程，其特異性依賴於與靶序列兩端互補的寡核苷酸引物。dna的半保留複製是生物進化和傳代的重要途徑。
雙鏈dna在多種酶的作用下可以變性解旋成單鏈，在dna聚合酶的參與下，根據鹼基互補配對原則複製成同樣的兩分子拷貝。在實驗中發現，dna在高溫時也可以發生變性解鏈，當溫度降低後又可以復性成為雙笑祥鏈。因此，通過溫度變化控制dna的變性和復性，加入設計引物，dna聚合酶、dntp就可以完成特定基因的體外複製。
pcr由變性--退火--延伸三個基本反應步驟構成：
1、模板dna的變性：模板dna經加熱至93℃左右一定時間後，使模板dna雙鏈或經pcr擴增碰碰搏形成的雙鏈dna解離，使之成為單鏈，以便它與引物結合，為下輪反應作準備。
2、模板dna與引物的退火（復性）：模板dna經加熱變性成單鏈後，溫度降至55℃左右，引物與模板dna單鏈的互補序列配對結合。
3、引物的延伸：dna模板--引物吵稿結合物在72℃、dna聚合酶（如taqdna聚合酶）的作用下，以dntp為反應原料，靶序列為模板，按鹼基互補配對與半保留複製原理，合成一條新的與模板dna鏈互補的`半保留複製鏈。
重複迴圈變性--退火--延伸三過程就可獲得更多的「半保留複製鏈」，而且這種新鏈又可成為下次迴圈的模板。每完成乙個迴圈需2～4分鐘，2～3小時就能將待擴目的基因擴增放大幾百萬倍。
pcr反應體系的基本構成包括（）
7樓：夏至
聚合酶。
模板。c.引物。d.脫氧核糖核苷酸分子。
正確答案：dna聚合酶；dna模板；引桐做如物；脫局啟氧核糖核苷酸分子。
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