細胞免疫螢光怎麼封片,細胞免疫螢光,求助

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細胞bai

免疫螢光的詳細操作du步驟 1,取出細胞爬片zhi放到35mm或60mm用過的細dao胞培養皿裡,pbs洗三遍。注回意有的時候答作的細胞爬片可能比較小,因此夾取的時候要小心。 2,4%多聚甲醛固定20分鐘,pbs洗三遍。

3,0.2%triton x 100通透10分鐘,pbs洗三遍。 4, 與二抗相同宿主的血清封閉30分鐘,pbs洗三遍。

5.,一抗4度濕盒內過夜,也可37度2小時,感覺前者效果好,pbs洗三遍。 6,二抗室溫2小時,或者37度1半小時,pbs洗三遍。

7,最好用dapi染核,然後直接照螢光片。 8,蒸餾水洗掉pbs,甘油封片,指甲油封**的四周。

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細胞爬片免疫螢光實驗步驟

第一天:

1. 在培養板中將已爬好細胞的玻片用pbs浸洗3次,每次3min;

2. 用4%的多聚甲醛固定爬片15min, pbs浸洗玻片3次,每次3min;

3. 0.5%triton x-100( pbs配製 )室溫通透20min(細胞膜上表達的抗原省略此步驟);

4. pbs浸洗玻片3次,每次3 min,吸水紙吸乾pbs,在玻片上滴加正常山羊血清,室溫封閉30min;

5. 吸水紙吸掉封閉液,不洗,每張玻片滴加足夠量的稀釋好的一抗並放入溼盒,4°C孵育過夜;

第二天:

6. 加螢光二抗: pbst 浸洗爬片3次,每次3min,吸水紙吸乾爬片上多餘液體後滴加稀釋好的螢光二抗,溼盒中20-37°C孵育1h,pbst浸洗切片3次,每次3min;

注意:從加螢光二抗起,後面所有操作步驟都盡量在較暗處進行。

7. 復染核:滴加dapi避光孵育5min,對標本進行染核,pbst 5min×4次洗去多餘的dapi;

8. 用吸水紙吸乾爬片上的液體,用含抗螢光淬滅劑的封片液封片,然後在螢光顯微鏡下觀察採集影象。

免疫螢光二抗洗過不封片怎麼處理

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建議抄使用二抗**的血清,襲這樣,如果樣品對二抗**有非特異吸附的話,在這一步就可以排除了,降低背景,提高訊雜比,比較有利於顯現一些弱的訊號。如果封閉不好,二抗直接與樣品結合,螢光背景高,就很難判斷結果了。

免疫螢光封片時的方法和配方

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50%的緩衝甘油,等體積的甘油+等體積的雙蒸水

細胞爬片做免疫螢光用什麼封片

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甘油不會凝固

bai,**不易長時

du間保

zhi存。指甲油、樹脂對螢光dao有影響,而且指內甲油所含有容機溶劑對物鏡不好。最好用專門的螢光封片劑。

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*histotec permanent aqueous mountant(serotec,immunological excelence)

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這兩個是現成的,買來就可以用,但**較貴。

sigma mowiol 4-88 是顆粒,需自己配製,量大,**很便宜。