1樓：e拍
因為一種一抗只識別一種底物，如果每種一抗都需要螢光標記，那這樣成本很高。而二抗既可以和一抗結合，又帶有可以被檢測出的標記（如帶螢光、放射性、化學發光或顯色基團），作用是檢測一抗，提高了通用性。
一抗是針對抗原的抗體，二抗是針對一抗的抗體，即抗體也可以充當抗原刺激機體產生抗體。一抗二抗都是一種可以特異結合別的物質的基團，而且一抗可以至少結合兩種其他基團（底物和二抗）。
擴充套件資料
免疫螢光技術是標記免疫技術中發展最早的一種．它是在免疫學、生物化學和顯微鏡技術的基礎上建立起來的一項技術。coons等於2023年首次採用螢光素進行標記抗體獲得成功。經過幾十年的發展，該技術已相當成熟。
主要特點是：特異性強、敏感性高、速度快。主要缺點是：非特異性染色問題尚未完全解決，結果判定的客觀性不足，技術程式也還比較複雜。
螢光免疫法按反應體系及定量方法不同，還可進一步分做若干種。與放射免疫法相比，螢光免疫法無放射性汙染，並且大多操作簡便，便於推廣。國外生產的tdm用試劑盒，有相當一部分即屬於此類，並且還有專供tdm螢光偏振免疫分析用的自動分析儀生產。
由於一般螢光測定中的本底較高等問題，螢光免疫技術用於定量測定有一定困難。新發展了幾種特殊的螢光免疫測定，與酶免疫測定和放射免疫分析一樣，在臨床檢驗中應用。
2樓：匿名使用者
螢光基團可以直接標記一抗，許多抗體公司都有螢光標記的一抗**。但是這樣成本高，一抗有成千上萬種，如果每種一抗都需要螢光標記，那使用起來非常不方便。所以通行的做法是標記二抗，而二抗的抗原則是一抗的igg，比如二抗可以標記兔抗鼠igg，那麼所有**於鼠的一抗就都可以用這個二抗進行檢測，提高了通用性。
免疫螢光標記為什麼不直接標記一抗而標記二抗
3樓：義翹神州加油
二抗能起到訊號放大的作用，如果僅僅依賴一抗，可能抗體需要量以及光亮強度都會受侷限。
即，一抗負責準確識別靶標分子，二抗負責訊號放大。典型實驗結果如下圖：
4樓：旁可居興
螢光基團
直接標記抗許
抗體公司都
螢光標記抗售
本高抗千萬種
每種抗都需要螢光標記
使用起非便所
通行做標記二抗
二抗抗原則
抗igg比二抗
標記兔抗鼠igg
所源於鼠抗都
用二抗進行檢測
提高通用性
如何選擇一抗，二抗！如何選擇實驗需要的抗體！最優回答！
5樓：匿名使用者
如何選擇 一抗 二抗！ 你真是問對人了！我現在就告訴你如何選擇實驗需要的抗體！最優回答注意看哦！
1. 一抗選擇
（1）確定抗體的名字，注意中英文名字、別名、亞型等資訊。
（2）確定您的實驗型別，elisa，wb，ihc，icc，或者是facs。biorbyt的每種抗體說明書都會列出抗體經驗證過適用的實驗型別，如果抗體說明書沒有提及的應用型別，並不意味著該抗體不適用於此種分析應用型別，而僅是說明尚未經過此種實驗驗證。
（3）確定實驗樣本的種屬，human，mouse，rat等。我們的抗體說明書都列出該抗體驗證過的適用物種，可根據說明書列出已驗證的種屬來選擇適合你實驗需要的抗體。
（4）樣本抗原蛋白的結構性質。了解樣本抗原蛋白的結構性質有助於選擇最合適的抗體，待測樣本蛋白的結構域和樣本在提取和處理過程中是否會變性，蛋白空間構象的改變，會影響抗體的免疫親和反應。
（5）單多轉殖抗體的選擇。一般單轉殖抗體特異性強，但親和力相對小，檢測抗原靈敏度相對就低；而多轉殖抗體特異性稍弱，但抗體的親和力強，靈敏度高，但易出現非特異性染色（可以通過封閉等避免）。
2. 二抗選擇
（1）種屬**。主要根據一抗種屬**而決定二抗**，如一抗是小鼠**，那二抗就買抗小鼠的即可（羊、兔等均可）。
（2）標記物的選擇。有hrp、biotin、螢光素等標記物。免疫組化，wb二抗主要選擇hrp，biotin標記的二抗，而免疫螢光染色可按實驗需要選擇不同螢光素標記的二抗，如fitc、cy3、pe等。
詳情可搜尋博歐特生物
請教免疫螢光雙標中螢光二抗的選擇是否合適？
6樓：南京金益柏生物科技****
一般來說,選擇合適的二抗需要從下面幾個方面考慮：
1.二抗應選用與使用的一抗相同的物種**;
2.二抗需與一抗的類別或亞類相匹配.這通常是針對單轉殖抗體而言.多轉殖抗體主要是igg類免疫球蛋白,因此相應的二抗就是抗igg抗體;
3.一般來說,不同的種屬**與二抗的質量沒有必然的聯絡,**於山羊的二抗與**於驢的二抗在一般的實驗裡沒有太多的差別.然而在一些特殊的實驗裡, 如雙標實驗裡,如果其中乙個一抗是山羊**的,乙個是小鼠**的,則相應的二抗分別要抗山羊和抗小鼠的二抗,這時候,二抗就不能選擇山羊或者小鼠**的.
免疫螢光染色的一抗，二抗分別用什麼稀釋？ 5
免疫螢光二抗和流式螢光二抗有什麼區別
7樓：南京金益柏生物科技****
二者有區別的，如果既要做免疫螢光標記又要做流式細胞術，在購買二抗時需先了解產品是否有兼有這兩種用途；也有但用於免疫螢光或但用於流式的二抗。
免疫螢光的一抗核二抗分別用什麼稀釋
螢光二抗標記用hrp、ap、fitc、生物素法各發什麼顏色螢光？
8樓：
這四個不是一碼事，hrp和ap是酶，二抗上掛了酶，要給相應的底物才能顯色，顯色方式可以通過發螢光也可以不發螢光（例如給予ecl底物，其中的h2o2和魯公尺諾在hrp的作用下，能在黑暗中發出螢光；也可以給予雙氧水和dab，反應產生棕色不溶於水的物質）；fitc為異硫氰酸螢光素，本身就是黃綠色螢光，二抗結合後可直接在螢光顯微鏡下觀察；生物素一般也是掛在二抗上的，利用卵白素分別連線生物素標記的第二抗體和生物標記的酶，由酶催化底物，生成終產物，這個終產物也是不溶於水的。
共聚焦顯微鏡可以先顯示轉染進去的綠色螢光，再顯示螢光二抗麼
9樓：
（62616964757a686964616fe4b893e5b19e313333633764311） 利用有色螢光蛋白標記技術進行蛋白定位研究
此法也可稱為活細胞定位.把兩種具有相互作用的蛋白分別轉殖到帶有兩種不同顏色螢光
蛋白（綠色螢光蛋白或紅色螢光蛋白）的載體中,共轉染到功能細胞中（一般選用 cos7 細胞）表達帶有螢光的融合蛋白.這樣,相互作用的兩種蛋白就被標上不同的螢光,可以在細胞內用螢光顯微鏡直接觀測.在進行精確細胞定位或共定位時,必須用共聚焦螢光顯微鏡觀測.
因為共聚焦螢光顯微鏡（相當於給病人診斷的 ct）觀測的是細胞內乙個切面上的顏色.如果在乙個切面上在同一區域看到兩種顏色,就提示這兩種蛋白在該區域內有相互作用.普通螢光顯微鏡看到的是乙個立體圖象,無法確定蛋白質共定位現象.
在進行定位或共定位同時,也可以對細胞核進行染色.這樣,在細胞中就有三種顏色.細胞核的顯色幫助你確定共定位發生的位置.
上面介紹的活細胞定位,其優點是表達的螢光蛋白螢光強,沒有背景,觀測方便.但缺點
是相互作用的蛋白由於標上螢光蛋白,實際上是兩個融合蛋白.融合蛋白的定位結果或共定位結果是否與天然蛋白分布一致,有待於進一步確定.而利用免疫螢光標記技術可以避免這一缺點.
（2） 利用雙色或多色染色的免疫螢光技術進行蛋白定位研究
免疫螢光的原理是,首先把細胞進行固定,然後用待檢測靶蛋白的抗體（一抗）與細胞內
靶蛋白進行免疫反應,再用螢光素（如 fitc 和 tritc 等）標記的二抗與一抗進行反應.這樣就在細胞內形成免疫複合物（靶蛋白----一抗---二抗）,結果靶蛋白被標上顏色,然後可用共聚焦螢光顯微鏡觀測定位與共定位結果.
免疫螢光技術最大優點就是可用來檢測細胞內源性蛋白的定位及相互作用.當然也可以對
靶細胞進行轉染表達目的蛋白,然後標記目的蛋白進行觀測.免疫螢光技術的缺點是螢光相對較弱並且背景較高,結果受到干擾,所以這項技術不好掌握.為了結果的可靠性,要求嚴格設計陽性對照與陰性對照.
（3） 細胞內蛋白動態定位
有時細胞在正常狀態下,有相互作用的蛋白在胞內可能暫時分開,沒有共定位現象發生.
但是在某乙個特定情況下,如細胞受到外界刺激時,細胞本身會產生應急反應,這時暫時分離的蛋白有可能發生相互作用,並產生共定位現象.所以在進行共定位研究時,可根據具體情況具體分析,必要時觀測細胞內蛋白動態定位結果.
細胞免疫螢光怎麼封片,細胞免疫螢光,求助
細胞bai 免疫螢光的詳細操作du步驟 1,取出細胞爬片zhi放到35mm或60mm用過的細dao胞培養皿裡,pbs洗三遍。注回意有的時候答作的細胞爬片可能比較小,因此夾取的時候要小心。2,4 多聚甲醛固定20分鐘,pbs洗三遍。3,0.2 triton x 100通透10分鐘,pbs洗三遍。4,與...
細胞免疫螢光和免疫螢光有什麼區別
1 蓋玻片節省抗體2 蓋玻片可以用高倍物鏡,拍攝的影象解析度更高。細胞鑑定是免疫螢光還是免疫組化 免疫組化和免疫螢光都是蛋白定位的檢測 也就是確定蛋白是表達在細胞核 漿 膜 免疫組織化學又稱免疫細胞化學,是指帶顯色劑標記的特異性抗體在組織細胞原位通過抗原抗體反應和組織化學的呈色反應,對相應抗原進行定...
免疫螢光染色mycmarker是怎樣的
1 空白對照 如抄果你做的是bai石蠟切片免疫組化,這個對照必須有,du目的是zhi看自發螢光dao,脫蠟後直接在螢光顯微鏡下觀察。2 陰性對照 標本直接滴加二抗,呈陰性反應。3 抗原對照 標本加同種動物的未免疫血清,以pbs沖洗後,在加抗免疫球蛋白螢光抗體。因未免疫動物的血清中無特異性抗體,應呈陰...