HE染色的原理he染色的操作步驟

2021-03-07 02:05:09 字數 5836 閱讀 5190

1樓:淺若清風

易於被鹼性或酸性染料著色的性質稱為嗜鹼性和嗜酸性。

對鹼性染料和酸性染料親和力都比較弱的現象稱為中性。

在普通染色法中,染色液的酸鹼度為ph6左右,細胞內的酸性物質如細胞核的染色質、腺細胞和神經細胞內的粗麵內質網及透明軟骨基質等均被鹼性染料染色,這些物質稱為嗜鹼性。

細胞質中的其它蛋白質如紅細胞中的血紅蛋白、嗜酸粒細胞的顆粒及膠原纖維和肌纖維等被酸性染料染色,這些物質稱為嗜酸型。

如果改變染色液的酸鹼度,ph值公升高時,則原來被酸性染料染色的物質可變為嗜鹼性;ph值降低時,原來被鹼性染料染色的物質則可變為嗜酸性。所以說染色液的ph值可以影響染色的反應。

擴充套件資料

脫氧核糖核酸(dna)兩條鏈上的磷酸基向外,帶負電荷,呈酸性,很容易與帶正電荷的蘇木精鹼性染料以離子鍵結合而被染色。

由於組織或細胞的不同成分對蘇木精的親和力不同及染色性質不一樣。經蘇木精染色後,細胞核及鈣鹽粘液等呈藍色,可用鹽酸酒精分化和弱鹼性溶液顯藍,如處理適宜,可使細胞核著清楚的深藍色,胞漿等其它成分脫色。再利用胞漿染料伊紅染胞漿,使胞漿的各種不同成分又呈現出深淺不同的粉紅色。

故各種組織或細胞成分與病變的一般形態結構特點均可顯示出來。

2樓:北京索萊寶科技****

he染色法為石蠟切片技術裡常用的染色法之一 。蘇木精染液為鹼性 ,主要使細胞核內的染色質與胞質內的核醣體著紫藍色 ;伊紅為酸性染料 ,主要使細胞質和細胞外基質中的成分著紅色 。he染色法是組織學、胚胎學、病理學教學與科研中最基本、使用最廣泛的技術方法。

he染色的原理:

易於被鹼性或酸性染料著色的性質稱為嗜鹼性( basophilia )和嗜酸性( acidophilia );而對鹼性染料和酸性染料親和力都比較弱的現象稱為中性(neutrophilia)。

組織內的蛋白質構成蛋白質的氨基酸的種類很多,它們有不同的等電點。在普通染色法中,染色液的酸鹼度為ph6左右,細胞內的酸性物質如細胞核的染色質、腺細胞和神經細胞內的粗麵內質網及透明軟骨基質等均被鹼性染料染色,這些物質稱為嗜鹼性。而細胞質中的其它蛋白質如紅細胞中的血紅蛋白、嗜酸粒細胞的顆粒及膠原纖維和肌纖維等被酸性染料染色,這些物質稱為嗜酸型。

如果改變染色液的酸鹼度,ph值公升高時,則原來被酸性染料染色的物質可變為嗜鹼性;ph值降低時,原來被鹼性染料染色的物質則可變為嗜酸性。所以說染色液的ph值可以影響染色的反應。

脫氧核糖核酸(dna)兩條鏈上的磷酸基向外,帶負電荷,呈酸性,很容易與帶正電荷的蘇木精鹼性染料以離子鍵結合而被染色。蘇木精在鹼性溶液中呈藍色,所以細胞核被染成藍色。伊紅y是一種化學合成的酸性染料,在水中離解成帶負電荷的陰離子,與蛋白質的氨基正電荷的陽離子結合使胞漿染色,細胞漿、紅細胞、肌肉、結締組織、嗜伊紅顆粒等被染成不同程度的紅色或粉紅色,與藍色的細胞核形成鮮明對比。

伊紅是細胞漿的良好染料。

由於組織或細胞的不同成分對蘇木精的親和力不同及染色性質不一樣。經蘇木精染色後,細胞核及鈣鹽粘液等呈藍色,可用鹽酸酒精分化和弱鹼性溶液顯藍,如處理適宜,可使細胞核著清楚的深藍色,胞漿等其它成分脫色。再利用胞漿染料伊紅染胞漿,使胞漿的各種不同成分又呈現出深淺不同的粉紅色。

故各種組織或細胞成分與病變的一般形態結構特點均可顯示出來。

3樓:用智慧型為你解答

木精 — 伊紅染色法 ( hematoxylin-eosin staining ) ,簡稱he染色法 ,石蠟切片技術裡常用的染色法之一 。蘇木精染液為鹼性 ,主要使細胞核內的染色質與胞質內的核醣體著紫藍色 ;伊紅為酸性染料 ,主要使細胞質和細胞外基質中的成分著紅色 。

去氧核糖核酸(dna)兩條鏈上的磷酸基向外,帶負電荷,呈酸性,很容易與帶正電荷的蘇木精鹼性染料以離子鍵結合而被染色。蘇木精在鹼性溶液中稱藍色,所以細胞核被染成藍色。伊紅y是一種化學合成的酸性染料,在水中離解成帶負電荷的陰離子,與蛋白質的氨基正電荷的陽離子結合使胞漿染色,細胞漿、紅細胞、肌肉、結締組織、嗜伊紅顆粒等被染成不同程度的紅色或粉紅色,與藍色的細胞核形成鮮明對比。

伊紅是細胞漿的良好染料。

由於組織或細胞的不同成分對蘇木精的親和力不同及染色性質不一樣。經蘇木精染色後,細胞核及鈣鹽粘液等呈藍色,可用鹽酸酒精分化和弱鹼性溶液顯藍,如處理適宜,可使細胞核著清楚的深藍色,胞漿等其它成分脫色。再利用胞漿染料伊紅染胞漿,使胞漿的各種不同成分又呈現出深淺不同的粉紅色。

故各種組織或細胞成分與病變的一般形態結構特點均可顯示出來。

4樓:匿名使用者

he染色法,即是蘇木精

-伊紅染色法。石蠟切片技術裡常用的染色法之一 。蘇木精染液為鹼性,主要使細胞核內的染色質與胞質內的核醣體著紫藍色;伊紅為酸性染料,主要使細胞質和細胞外基質中的成分著紅色。

易於被鹼性或酸性染料著色的性質分別稱為嗜鹼性和嗜酸性;若於兩種染料的親和力都不強,則稱中性。一般的組織變化和組織產物都可以通過這一染色法顯示出來。是形態學最常用的染色方法。

直到目前為止,病理組織學的基本知識,絕大多數都是從觀察he染色標本中得來,在質量較佳的he染色切片上,各種組織或細胞的一般形態結特點都可以觀察到。

5樓:may芷璇格格

即是蘇木精-伊紅染色法。

he染色的操作步驟

6樓:tcoo_阿西

he染色步驟:

1、脫蠟,脫蠟二甲苯ⅰ、ⅱ各10分鐘,事先準備好蓋玻片。

2、覆水,100%(ⅰ、ⅱ)、90%、80%、70%酒精各5分鐘,自來水沖洗5分鐘×3。

3.、蘇木精染色5分鐘,根據染色情況,可以適當增加或減少染色時間,流水沖洗。

4、5%乙酸分化1分鐘,流水沖洗,用吸管滴加乙酸,布滿玻片上的組織即可,分化後顏色變淺了一些,成為藍色。

5、返藍:返藍液,實驗室沒有,也可不用。

6、伊紅染色1分鐘,根據染色情況,可以適當增加或減少染色時間,流水沖洗。

7、脫水:70%、80%、90%、100%酒精各10秒,二甲苯1分鐘,可以在通風櫥自然晾乾再封

片,約5分鐘左右。

8、滴上中性樹膠,封片,用吸管滴上一滴即可,盡量少滴,但壓片後要將組織全部覆蓋完,避免中間有氣泡。

7樓:筱曉小魚兒

將石蠟切片置於烘箱中60℃烤1~2h;

石蠟切片常規二甲苯,乙醇脫蠟至水,

蘇木素染10分鐘,

流水沖洗,去餘色,

0.7%鹽酸乙醇分化數秒鐘,

流水沖洗,切片變藍約15分鐘,

7.95%乙醇30秒鐘,

8.酒精性伊紅染30秒,

i 95%乙醇30秒鐘,

ii 95%乙醇30秒鐘,

i 100%乙醇30秒鐘,

ii100%乙醇30秒鐘,

石碳酸二甲苯30秒鐘,(1: 4石碳酸1-二甲苯4)i二甲苯30秒鐘,

ii二甲苯30秒鐘,

中性樹膠封片。

he染色操作流程:

he染色,即是蘇木精-伊紅染色法,是形態學最常用的染色方法,在質量較佳的he染色切片上,各種組織或細胞的一般形態結特點都可以觀察到。蘇木精染液為鹼性,主要使細胞核內的染色質與胞質內的核醣體著紫藍色;伊紅為酸性染料,主要使細胞質和細胞外基質中的成分著紅色。

8樓:北京索萊寶科技****

【試劑材料]】

1.試劑:0.5%醇溶性伊紅染液,改良的哈瑞(harris)蘇木素,0.5%鹽酸酒精溶液

1.1 伊紅:

配製方法:中性紅 0.5g,80%酒精100ml,將伊紅溶於酒精內攪拌,全部溶解後即可使用。

1.2蘇木精:

配製方法:a液: 蘇木素1g,無水酒精10ml

b液:硫酸鋁鉀20g,蒸餾水200ml

兩液分別溶解後混合,加熱煮沸後,慢慢加入紅色氧化汞0.5g,此時有大量氣泡產生,故容器要大,以防液體溢位,然後將染液迅速冷卻,冷卻後過濾,並每100ml加入冰醋酸6ml,甘油10ml。

1.3 0.7%鹽酸酒精溶液

配製方法:鹽酸0.7ml,70%酒精100ml

2.材料:石蠟切片

[操作流程]

1.將石蠟切片置於烘箱中60℃烤1~2h;

2.石蠟切片常規二甲苯,乙醇脫蠟至水,

3.蘇木素染10分鐘,

4.流水沖洗,去餘色,5.0.7%鹽酸乙醇分化數秒鐘,

6.流水沖洗,切片變藍約15分鐘,

7.95%乙醇30秒鐘,

8.酒精性伊紅染30秒,

9.i 95%乙醇30秒鐘,

10.ii 95%乙醇30秒鐘,

11.i 100%乙醇30秒鐘,

12.ii100%乙醇30秒鐘,

13.石碳酸二甲苯30秒鐘,(1: 4石碳酸1-二甲苯4)

14.i二甲苯30秒鐘,

15.ii二甲苯30秒鐘,

16.中性樹膠封片。

[實驗結果]: 鏡下觀察細胞核呈藍色;細胞漿一般呈紅色;膠原纖維呈不同程度的紅色,紅細胞呈亮紅色;

9樓:想自由8q玞

(1)二甲苯(ⅰ) 15min

(2) 二甲苯(ⅱ) 15 min

(3)二甲苯:無水乙醇=1:1 2min

(4)100%乙醇(ⅰ) 5min

(5)100%乙醇(ⅱ) 5 min

(6)80%乙醇 5min

(7)蒸餾水 5 min

(8)蘇木**染色 5 min

(9) 流水稍洗去蘇木** 1-3 s

(10) 1%鹽酸乙醇 1-3 s

(11) 稍水洗 10-30 s

(12)蒸餾水過洗 1-2 s

(13) 0.5%伊紅液染色 1-3 min

(14) 蒸餾水稍洗 1-2 s

(15) 80%乙醇稍洗 1-2 s

(16) 95%乙醇(ⅰ) 2-3 s

(17) 95%乙醇(ⅱ) 3-5 s

(18) 無水乙醇 5-10 min

(19) 石炭酸二甲苯 5-10 min

(20) 二甲苯(ⅰ) 2 min

(21) 二甲苯(ⅱ) 2 min

(22) 二甲苯(ⅲ) 2 min

(23) 中性樹膠封固

注:①第(11)、(12)步可省去,(13)步沖水時間需延長至20-30min。

②第(21)步如果不用石炭酸二甲苯,可改用無水乙醇。 (1)冰凍切片固定 10~30 s

(2)稍水洗 1~2 s

(3)蘇木**染色(60℃) 30~60 s

(4)流水洗去蘇木** 5~10 s

(5)1%鹽酸乙醇 1~3 s

(6)稍水洗 1~2 s

(7)促藍液返藍 5~10 s

(8)流水沖洗 15~30 s

(9)0.5%曙紅液染色 30~60 s

(10)蒸餾水稍洗 1~2 s

(11)80%乙醇 1~2 s

(12)95%乙醇 1~2 s

(13)無水乙醇 1~2 s

(14)石炭酸二甲苯 2~3 s

(15)二甲苯(ⅰ) 2~3 s

(16)二甲苯(ⅱ) 2~3 s

(17)中性樹膠封固。

注:第(14)步如果不用石炭酸二甲苯,可改用無水乙醇。

染色結果:細胞核藍色,胞質、肌纖維、膠原纖維和紅細胞呈深淺不一的紅色。 細胞核被蘇木精染成鮮明的藍色,軟骨基質、鈣鹽顆粒呈深藍色,粘液呈灰藍色。

細胞漿被伊紅染成深淺不同的粉紅色至桃紅色,胞漿內嗜酸性顆粒呈反光強的鮮紅色。膠原纖維呈淡粉紅色,彈力纖維呈亮粉紅色,紅血球呈橘紅色,蛋白性液體呈粉紅色。

著色情況與組織或細胞的種類有關,也隨其生活週期及病理變化而改變。例如,細胞在新生時期胞漿對伊紅著色較淡或輕度嗜鹼,當其衰老時或發生退行性變則呈現嗜伊紅濃染。膠原纖維在老化和出現透明變性時,伊紅著色由淺變深。

(1)切片完整,厚度4-6微公尺,厚薄均勻,無皺褶無刀痕;

(2)染色核漿分明,紅藍適度,透明潔淨,封裱美觀。

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