革蘭氏染色法的原理,革蘭氏染色的步驟和原理

2021-03-28 06:10:07 字數 5402 閱讀 3058

1樓:暴走少女

革蘭氏染色法的原理是通過結晶紫初染和碘液媒染後,在細胞壁內形成了不溶於水的結晶紫與碘的複合物,革蘭氏陽性菌由於其細胞壁較厚、肽聚醣網層次較多且交聯緻密,故遇乙醇脫色處理時,因失水反而使網孔縮小,再加上它不含類脂,故乙醇處理不會出現縫隙。

因此能把結晶紫與碘複合物牢牢留在壁內,使其仍呈紫色;而革蘭氏陰性菌因其細胞壁薄、外膜層類脂含量高、肽聚醣層薄且交聯度差。

在遇脫色劑後,以類脂為主的外膜迅速溶解,薄而鬆散的肽聚醣網不能阻擋結晶紫與碘複合物的溶出,因此通過乙醇脫色後仍呈無色,再經沙黃等紅色染料復染,就使革蘭氏陰性菌呈紅色。

2樓:秦也抱只貓

簡單來說:通過結晶紫初染和碘液媒染後,在細菌細胞壁內形成了不溶於水的結晶紫與碘的複合物,再用95%乙醇脫色。

具體來說:通過結晶紫初染和碘液媒染後,在細胞壁內形成了不溶於水的結晶紫與碘的複合物,革蘭氏陽性菌由於其細胞壁較厚、肽聚醣網層次較多且交聯緻密,故遇乙醇脫色處理時,因失水反而使網孔縮小,再加上它不含類脂,故乙醇處理不會出現縫隙,因此能把結晶紫與碘複合物牢牢留在壁內,使其仍呈紫色;

而革蘭氏陰性菌因其細胞壁薄、外膜層類脂含量高、肽聚醣層薄且交聯度差,在遇脫色劑後,以類脂為主的外膜迅速溶解,薄而鬆散的肽聚醣網不能阻擋結晶紫與碘複合物的溶出,因此通過乙醇脫色後仍呈無色,再經沙黃等紅色染料復染,就使革蘭氏陰性菌呈紅色。

g﹢菌:細胞壁厚,肽聚醣網狀分子形成一種透性屏障,當乙醇脫色時,肽聚醣脫水而孔隙縮小,故保留結晶紫-碘複合物在細胞膜上。呈紫色。

gˉ菌:肽聚醣層薄,交聯鬆散,乙醇脫色不能使其結構收縮,其脂含量高,乙醇將脂溶解,縫隙加大,結晶紫-碘複合物溶出細胞壁,番紅染液復染後呈紅色。

3樓:立鶴尾

g+菌:細胞壁厚,肽聚醣網狀分子形成一種透性障,當乙醇脫色時,肽聚醣脫水而孔障縮小,故保留結晶紫-碘複合物在細胞膜上。呈紫色。

gˉ菌:肽聚醣層薄,交聯鬆散,乙醇脫色不能使其結構收縮,其脂含量高,乙醇將脂溶解,縫隙加大,結晶紫-碘複合物溶出細胞壁,沙黃復染後呈紅色。

4樓:寵魅

革蘭氏染色法的原理是浸泡原理

革蘭氏染色的步驟和原理

5樓:鵝子野心

操作步驟:

1 .塗片

將培養的不同菌分別作塗片(注意塗片切不可過於濃厚),乾燥、固定。固定時通過火焰1一2 次即可,不可過熱,以載玻片不燙手為宜。

2 .染色

( 1 )初染加草酸鉸結晶紫一滴,約一分鐘,水洗。

( 2 )媒染滴加碘液衝去殘水,並覆蓋約一分鐘,水洗。

( 3 )脫色將載玻片上面的水甩淨,並襯以白背景,用95 %酒精滴洗至流出酒精剛剛不出現紫色時為止,約20 一30 秒鐘,立即用水沖淨酒精。

( 4 )復染用番紅液染1 一2 分鐘,水洗。

( 5 )鏡檢乾燥後,置油鏡觀察.革蘭氏陰性菌呈紅色,革蘭氏陽性菌呈紫色。以分散開的細菌的革蘭氏染色反應為準,過於密集的細菌,常常呈假陽性。

( 6 ) 同法在一載玻片上以大腸桿菌與枯草芽孢桿菌混合製片,作革蘭氏染色對比。

革蘭氏染色的關鍵在於嚴格掌握酒精脫色程度,如脫色過度,則陽性菌可被誤染為陰性菌;而脫色不夠時,陰性菌可被誤染為陽性菌。此外,菌齡也影響染色結果,如陽性菌培養時間過長,或已死亡及部分菌自行溶解了,都常呈陰性反應。

原理:革蘭氏染色反應是細菌分類和鑑定的重要性狀。它是1884 年由丹麥醫師gr 二創立的。

革蘭氏染色法(gram stain )不僅能觀察到細菌的形態而且還可將所有細菌區分為兩大類:染色反應呈藍紫色的稱為革蘭氏陽性細菌,用g+表示:染色反應呈紅色(復染顏色)的稱為革蘭氏陰性細菌,用g 一表示。

細菌對於革蘭氏染色的不同反應,是由於它們細胞壁的成分和結構不同而造成的。革蘭氏陽性細菌的細胞壁主要是由膚聚醣形成的網狀結構組成的,在染色過程中,當用乙醇處理時,由於脫水而引起網狀結構中的孔徑變小,通透性降低,使結晶紫一碘複合物被保留在細胞內而不易脫色,因此,呈現藍紫色;革蘭氏陰性細菌的細胞壁中膚聚醣含量低,而脂類物質含量高,當用乙醇處理時,脂類物質溶解,細胞壁的通透性增加,使結晶紫一碘複合物易被乙醇抽出而脫色,然後又被染上了復染液(番紅)的顏色,因此呈現紅色。

革蘭氏染色需用四種不同的溶液:鹼性染料(basic dye )初染液;媒染劑(mordant ) ;脫色劑( decolorising agent )和復染液(counter stain )。鹼性染料初染液的作用象在細菌的單染色法基本原理中所述的那樣,而用於革蘭氏染色的初染液一般是結晶紫(crystal violet )。

媒染劑的作用是增加染料和細胞之間的親和性或附著力,即以某種方式幫助染料固定在細胞上,使不易脫落,碘(iodine ) 是常用的媒染劑。脫色劑是將被染色的細胞進行脫色,不同型別的細胞脫色反應不同,有的能被脫色,有的則不能,脫色劑常用95 %的酒精(ethanol )。復染液也是一種鹼性染料,其顏色不同於初染液,復染的目的是使被脫色的細胞染上不同於初染液的顏色,而未被脫色的細胞仍然保持初染的顏色,從而將細胞區分成g +和g 一兩大類群,常用的復染液是番紅。

6樓:林與潘

一、 目的:在細胞發放之前,利用標準的革蘭氏染色法對即將發放的細胞懸液進行檢測,判斷細胞懸液中是否含有革蘭氏陽性菌或革蘭氏陰性菌。

二、 原理:

7樓:張鈺濤

步驟:包括初染、媒染、脫色、復染等四個步驟。

原理:染色後細菌與環境形成鮮明對比,可以清楚地觀察到細菌的形態、排列及某些結構特徵,而用以分類鑑定。

革蘭氏染色法是細菌學中廣泛使用的一種鑑別染色法,2023年由丹麥醫師gram創立。未經染色之細菌,由於其與周圍環境折光率差別甚小,故在顯微鏡下極難觀察。染色後細菌與環境形成鮮明對比,可以清楚地觀察到細菌的形態、排列及某些結構特徵,而用以分類鑑定。

革蘭氏染色屬復染法。

革蘭氏染色法是細菌學中廣泛使用的一種鑑別染色法,這種染色法是由一位丹麥醫生漢斯·克里斯蒂安·革蘭(hans christian gram,2023年-2023年)於2023年所發明,最初是用來鑑別肺炎球菌與克雷白氏肺炎菌之間的關係。

未經染色之細菌,由於其與周圍環境折光率差別甚小,故在顯微鏡下極難觀察陽性紫色陰性紅色。染色後細菌與環境形成鮮明對比,可以清楚地觀察到細菌的形態、排列及某些結構特徵,而用以分類鑑定。

革蘭氏染色法的重要意義是什麼

8樓:人生如夕陽

革蘭氏染色法不僅用來觀察細菌的形態,而且它還是細菌鑑定的重要方法,微生物的細胞小且透明,在普通光學顯微鏡下不易識別,必須對它們進行染色,使經染色後的菌體與背景形成明顯的色差,從而能更清楚地觀察到其形態和結構。因此,微生物染色技術是觀察微生物形態結構的重要手段。

革蘭氏染色反應是細菌分類和鑑定的重要性狀。它是2023年由丹麥醫師gram創立的。革蘭氏染色法(gram stain)不僅能觀察到細菌的形態,而且還可將所有細菌區分為兩大類:

染色反應呈藍紫色的稱為革蘭氏陽性細菌,用g+表示;染色反應呈紅色(復染顏色)的稱為革蘭氏陰性細菌,用g-表示。細菌對革蘭氏染色的不同反應,是由於它們細胞壁的成分和結構不同而造成的。革蘭氏陽性細菌的細胞壁主要是由肽聚醣形成的網狀結構組成的,在染色過程中,當用乙醇處理時,由於脫水而引起網狀結構中的孔徑變小,通透性降低,使結晶紫-碘複合物被保留在細胞內而不易脫色,因此,呈現藍紫色;革蘭氏陰性細菌的細胞壁中肽聚醣含量低,而脂類物質含量高,當用乙醇處理時,脂類物質溶解,細胞壁的通透性增加,使結晶紫-碘複合物易被乙醇抽出而脫色,然後又被染上了復染液(番紅)的顏色,因此呈現紅色。

9樓:瑣碎

重要意義:

為了研究細菌的形態,微生物學家發明了對細菌的染色,有用一種染色劑的稱單染,僅能對細菌形態觀察。用兩種以上的稱復染,革蘭氏發明了復染色法;先後用兩種染色劑和媒染劑、脫色劑組合,由此而命名為革蘭染色。

革蘭染色不僅可以觀察細菌的形態,同時將細菌分為兩大類。一類是染色陽性菌是紫色,另一類染色陰性的是紅色。

由於細菌的結構上的差異,形成了不同的染色效果。了解染色效能有助於臨床用藥和細菌的鑑定;

如青黴素對革蘭染色陽性菌有效,當化膿性細菌感染可首選藥物。而氟哌酸對革蘭染色陰性桿菌有效,如腸道病、腹瀉為常用藥。

當從尿道培養出革蘭陰性雙球菌,可以作為淋病感染的重要指症。如出現革蘭染色陽性的葡萄球菌,又可作為金黃色葡萄球菌感染依據。

革蘭氏染色法

是細菌學中廣泛使用的一種鑑別染色法,這種染色法是由一位丹麥醫生漢斯·克里斯蒂安·革蘭(hans christian gram,2023年-2023年)於2023年所發明,最初是用來鑑別肺炎球菌與克雷白氏肺炎菌之間的關係。

陽性紫色陰性紅色

未經染色之細菌,由於其與周圍環境折光率差別甚小,故在顯微鏡下極難觀察

陽性紫色陰性紅色。染色後細菌與環境形成鮮明

對比,可以清楚地觀察到細菌的形態、排列及某些結構特徵,而用以分類鑑定。

原理 通過結晶紫初染和碘液媒染後,在細胞壁內形成了不溶於水的結晶紫與碘的複合物,革蘭氏陽性菌由於其細胞壁較厚、肽聚醣網層次較多且交聯緻密,故遇乙醇或丙酮脫色處理時,因失水反而使網孔縮小,再加上它不含類脂,故乙醇處理不會出現縫隙,,因此能把結晶紫與碘複合物牢牢留在壁內,使其仍呈紫色;而革蘭氏陰性菌因其細胞壁薄、外膜層類脂含量高、肽聚醣層薄且交聯度差,在遇脫色劑後,以類脂為主的外膜迅速溶解,薄而鬆散的肽聚醣網不能阻擋結晶紫與碘複合物的溶出,因此通過乙醇脫色後仍呈無色,再經沙黃等紅色染料復染,就使革蘭氏陰性菌呈紅色。

致病菌如:

金黃色葡萄球菌、綠色溶血性鏈球菌、肺炎球菌、白喉桿菌、炭疽桿菌等 屬革蘭氏染色陽性菌。

百日咳桿菌、大腸桿菌、傷寒桿菌、痢疾桿菌、霍亂弧菌、流行性腦膜炎雙球菌、淋病雙球菌等 屬革蘭氏陰性。

所以根據細菌的革蘭氏染色性質,可以縮小鑑定範圍,有利於進一步分離鑑定,以對疾病做出診斷。又由於各種抗生素的抗菌譜不同,革蘭氏染色尚可做為選用抗生素的參考。

實驗方法

革蘭氏染色法一般包括初染、媒染、脫色、復染等四個步驟,具體操作方法是:

1)塗片固定。

2)草酸銨結晶紫染1分鐘。

3)自來水沖洗。

4)加碘液覆蓋塗面染約1分鐘。

5)水洗,用吸水紙吸去水分。

6)加95%酒精數滴,並輕輕搖動進行脫色,20秒後水洗,吸去水分。

7)蕃紅梁色液(稀)染2分鐘後,自來水沖洗。乾燥,鏡檢。

原理通過結晶紫初染和碘液媒染後,在細胞壁內形成了不溶於水的結晶紫與碘的複合物,革蘭氏陽性菌由於其細胞壁較厚、肽聚醣網層次較多且交聯緻密,故遇乙醇或丙酮脫色處理時,因失水反而使網孔縮小,再加上它不含類脂,故乙醇處理不會出現縫隙,,因此能把結晶紫與碘複合物牢牢留在壁內,使其仍呈紫色;而革蘭氏陰性菌因其細胞壁薄、外膜層類脂含量高、肽聚醣層薄且交聯度差,在遇脫色劑後,以類脂為主的外膜迅速溶解,薄而鬆散的肽聚醣網不能阻擋結晶紫與碘複合物的溶出,因此通過乙醇脫色後仍呈無色,再經沙黃等紅色染料復染,就使革蘭氏陰性菌呈紅色。

染色結果

革蘭氏正反應菌體都呈紫色,負反應菌體都呈紅色。

臨床意義

其重要的臨床意義在於:1.鑑別細菌 2.選擇藥物 3.與致病性有關::革蘭氏陽性菌能產生外毒素,革蘭氏陰性菌能產生內毒素,兩者的致病作用不同。

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