1樓：匿名使用者
一般要考慮以下幾點 1. 細胞生長狀態和密度: 不要用經過多次轉接或儲於4℃的培養菌，最好從－70℃或-20℃甘油儲存的菌種中直接轉接用於製備感受態細胞的菌液。
細胞生長密度以剛進入對數生長期時為好，可通過監測培養液的od600 來控制。dh5α菌株的od600 為0.5時,細胞密度在5×107 個/ml左右(不同的菌株情況有所不同),這時比較合適。
密度過高或不足均會影響轉化效率.
2. 質粒的質量和濃度: 用於轉化的質粒dna應主要是超螺旋態dna(cccdna)。
轉化效率與外源dna的濃度在一定範圍內成正比,但當加入的外源dna的量過多或體積過大時,轉化效率就會降低。1ng的cccdna即可使50μl 的感受態細胞達到飽和。一般情況下,dna溶液的體積不應超過感受態細胞體積的5％。
3. 試劑的質量: 所用的試劑,如cacl2 等均需是最高純度的(gr.或ar.),並用超純水配製,最好分裝儲存於乾燥的冷暗處。
4. 防止雜菌和雜dna的汙染：整個操作過程均應在無菌條件下進行, 所用器皿, 如離心管, tip頭等最好是新的,並經高壓滅菌處理,所有的試劑都要滅菌,且注意防止被其它試劑、dna酶或雜dna所汙染, 否則均會影響轉化效率或雜dna的轉入, 為以後的篩選、鑑定帶來不必要的麻煩。
更多實驗問題可以諮詢中洪博元。
為了提高感受態細胞的轉化率，實驗中需要考慮哪些因素？
2樓：蘇素
影響感受態細胞bai轉化du效率的因素及zhi實際操作過程中應注意的事dao項：
1．細菌的內生長狀態：實驗中應容密切注視細菌的生長狀態和密度，盡量使用對數生長期的細胞（一般通過檢測od600來控制。dh5α菌株 od600為 0.
5 時細胞密度是 5 × 107/ml ）；
2．所有操作均應在無菌條件和冰上進行；
3．經 cacl2處理的細胞，在低溫條件下，一定的時間內轉化率隨時間的推移而增加， 24小時達到最高，之後轉化率再下降（這是由於總的活菌數隨時間延長而減少造成的）；
4．化合物及無機離子的影響：在 ca2+的基礎上聯合其他二價金屬離子（如 mn2+或 co2+）、 dmso 或還原劑等物質處理細菌，可使轉化效率大大提高（ 100-1000 倍）；
5．所使用的器皿必須乾淨。跡量的去汙劑或其它化學物質的存在可能大大降低細菌的轉化效率；
6．質粒的大小及構型的影響：用於轉化的應主要是超螺旋的 dna ；
7．一定範圍內，轉化效率與外源 dna 的濃度呈正比；
如何提高 愛德華氏菌 轉化效率
3樓：
在不加大進風量的前提下適當公升高上段溫度使部分焦油氣化裂解成co，針對煤的種類找出適用溫度
用氯化鈣法將質粒dna轉化入大腸桿菌實驗中，轉化成功的關鍵因素有哪些？
4樓：匿名使用者
1.細菌的生長狀態抄和密度襲：od006=0.3~0.5 細菌出於對數期或者對數前期
2.質粒dna：數量：
質粒dna不超過感受態細胞體積的5%大小：分子量越大轉化效率越低，超過30kb的質粒dna很難轉化成功構型：超螺旋的dna具有較高的轉化效率，重組dna效率低一些，環狀dna相比線性dna轉化效率高一些
3.所用試劑純度、質量、器皿的潔淨程度
4.防止雜菌和其他外源dna的汙染
pbs質粒的轉化
5樓：燈下草蟲
先設計你的目的基因片段的引物，進行菌落pcr，確認陽性後再提質粒，不然白費功夫。強烈懷疑是你的抗生素失效了。抗生素在-20度只能儲存乙個月，4度一周，室溫三天就失效了。
當質粒轉化進大腸桿菌時，通過什麼原理表達目的基因
6樓：聽風
當質粒來轉化進大腸桿菌時，通過源dna複製原理表達目的基因。
baicacl2對特定du的大腸桿菌處理，製備感受zhi態的細菌。dao這些細菌可使每微克超螺旋質粒dna，如一些插入目的dn**段的重組質粒，產生5×106~2×107 個轉化的菌落。當質粒與這些大腸桿菌混合後，質粒粘附在大腸桿菌的表面，在42℃的溫度時，大腸桿菌出現熱休克，質粒可通過大腸桿菌細胞膜上形成的空隙進入菌體內。
隨後，加入lb培養液，於37℃振動培養可使細菌復甦，並且表達質粒編碼的抗生素抗性基因，提高轉化效率。轉化成功的大腸桿菌可以在相應抗生素培養皿中傳代，形成菌落。
由於大腸桿菌繁殖快，在適宜的條件下繁殖一代僅需要20~30分鐘，而且常用質粒可以在大腸桿菌中達到幾百個拷貝，因此，通過對轉化成功的大腸桿菌培養，可以在短時內極大地擴增目的質粒。（作為分子生物學用大腸桿菌，是經過實驗室改造過的工程菌。）
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