1樓：匿名使用者
需要有isotype control，也就是同型非特異性抗體的對照。
在另外的乙個管子中，加入同樣亞型的，同樣螢光標記的，但是非特異性的抗體，一樣孵育。清洗。上機後，用該管得到的訊號來設定螢光強度的閾值，就可以減少假陽性了。
細胞凋亡檢測都有哪些方法？我自己做了流式，感覺做不好，想諮詢下哪些公司可以做。
2樓：匿名使用者
流式檢測凋亡的方法有很多種，不同的方法適用於不同的細胞型別。目前乙個很大的誤區就是濫用annexin v +pi來檢測各種細胞的凋亡。這個方法是為了檢測懸浮細胞，比如白細胞而設計的。
貼壁培養，或者直接從組織分離得到的細胞不適合用這個方法檢測。因為在處理細胞的時候回造成大量的假陽性。
貼壁細胞可以採用檢測caspase活性的方法來反應凋亡，而且方法很簡單。目前有caspase底物結合的螢光染料。直接加到細胞培養液裡面。
細胞攝取後，如果處於凋亡期，細胞內的caspase-3/7啟用。，降解了底物，螢光染料釋放後進入細胞核，染色dna，這個細胞在流式檢測時就是陽性細胞。
這種試劑盒invitrogen出的，有好幾種顏色可選
流式細胞儀可以分選迴圈腫瘤細胞嗎
流式細胞術檢測抗體孵育後需要pbs清洗嗎
流式細胞儀檢測的樣品順序可以改變嗎
3樓：低
流式檢測的是單個細胞，所以你的樣本要是單個細胞懸液。如果是**於組織或者貼壁培養的，需要注意在分離細胞時避免破壞細胞。保持細胞膜表面的完整性。不要過度消化。
還有你處理的細胞要保持你所需要檢測的本來面目。比如檢測凋亡，貼壁細胞不宜用annexin方法，因為會導致大量的假陽性。還有，死細胞會非特異性吸附抗體，導致假陽性也要儘量減少死細胞，或者使用死細胞染料以排除在分析之外。
如何選擇適合的流式抗體（五）：舉例
4樓：匿名使用者
① 目標蛋白特異性：確定目的細胞的特異性表面標記或者胞內標記，確定檢測指標；
③ 可用於流式實驗 ，說明書中明確標註經fc 實驗測試，最好有實驗資料圖和用量說明 ；
流式細胞術的應用範圍
流式細胞儀 fitc-pi雙染hek293t細胞 空白組細胞凋亡率很高
5樓：匿名使用者
做這個實驗，有幾個要求：
第一，貼壁培養的細胞要處理的非常輕柔專，不然會導致大量假陽屬性（annexin v 陽性）。這個方法最好是由於懸浮培養的，比如淋巴細胞
第二，從圖上看，你的電壓設定的過低，第乙個圖陰性無染色的細胞都被壓倒一起，而不是位於左下象限的中間。另外，你的陽性對照的細胞，用的是已知確定凋亡死亡的細胞嗎？pi的染色看起來很弱
第三，annexin v單染沒有強陽性，而且這個細胞群都有右移，這個提示很可能是你處理細胞過頭導致的假陽性。
第四，你沒有貼fsc-ssc的圖。真有凋亡發生，那個圖也會有變化的。
第五，你的單染對照因為設定的電壓過低，沒有做對雙色補償，所以你這個實驗資料時無效的。
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