1樓:法師藥材店
pet系列是baiiptg誘導表達的,一般構建了dupet表達載zhi體匯入表達宿dao主菌(bl21等),用回lb培養基在37度液體培養到
答od600值0.7左右的時候,加入終濃度為0.1-1.
0mm的iptg(濃度對誘導表達影響不是很大,對於pet系統,對iptg濃度要求稍高,建議直接採用1mm),然後再37度培養4小時左右,接著就可以收集菌體進行sds-page檢測了。需要注意的是,大腸桿菌表達系統表達真核生物的蛋白時絕大部分情況是會以包涵體形式表達的,即使是可溶性表達非常好的pet系統也不能避免。所以如果你表達的蛋白需要有活性的話,建議加入iptg後,降低溫度進行誘導(25-30),這樣可以增加可溶性表達的蛋白的比例。
另外如果只是用在製備抗體,那麼則可以不用管是否是包涵體表達。
載體pet28a構建重組質粒,測序準確,轉至bl21原核表達蛋白,,怎麼也誘導不出來?同批次的bl21別人能誘導
2樓:匿名使用者
1 可能是太弱你看不出來,建議用his抗體做個western 看看是不是有條帶而看不出。
2 是不是融解性太差,建議將你的氨基酸序列做個疏水性分析。如果確實如此的話可能要重新構載體
3樓:美吉生物
換個載體試試,是經常有這種情況的,怎麼表達都表達出來,換個載體就表達出來了,你可以試下
4樓:匿名使用者
有可能是表達量太小,先做個wb驗證下
iptg濃度感覺有點大,我們實驗室最大不超過1mm,一般是0.2mm。
如果可以還是換個載體,感覺28a不怎麼好純化
pet28a怎麼也誘導不出來目的蛋白
5樓:匿名使用者
誘導表達沒有目的蛋白產生原因無非兩種一是誘導條件不適合目的蛋白的表內達,可通過改變培養容基,溫度,誘導劑等條件重新摸索出合適的誘導條件。二是目的蛋白的菌種有問題,可通過塗板挑菜單轉殖菌落重新培養,或者質粒重新轉化表達菌株等方法優化菌種。
pet28a做表達載體,蛋白就是不表達,求助
6樓:匿名使用者
蛋白不表達的原因很多,有載體的原因,但肯不定不完全是載體的原因。
可以試試不同的表達菌株,誘導濃度,誘導溫度,誘導時間等等。
pet28a載體表達,我的融合蛋白分子量應該多大?計算公式是什麼?
7樓:左材完青旋
你真的好苗條呀,連我這個女孩子都羨慕~大胡同的天都**,4樓褲子城,天津大部分商場的褲子就是從那裡進的貨源
8樓:芊芊芊尋
加上前面的融合肽以及終止子之前翻譯的乙個肽段,最終表達的蛋白分子量是59kd左右
9樓:竭蕾宓穎慧
搜一下:pet28a載體表達,我的融合蛋白分子量應該多大?計算公式是什麼
pet載體比較pbr322有哪些優點
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