提取質粒對於科學研究實驗有什麼作用？
1樓：每天七毛錢
質粒是基因工程的運載體，可以通過質粒把一些想要的基因匯入其他生物的體內，讓生物表現出認為想要的性狀。
基因工程的原理是基因重組，可以通過這種方法快速的實現育種。
質粒的提取方法
2樓：惠企百科
從具體操作方法分可以分為鹼裂解法、煮沸法、牙籤法等。
在氫氧化鈉（鹼性環境）和去汙劑sds的作用下，細菌蛋白質變性，細胞破裂，細菌染色體dna變性，雙鏈dna氫鍵斷裂，dna雙螺旋結構遭破壞而發生變形。
但由於質粒dna相對分子質量較小，公價閉環的dna雖然變性但仍處於拓撲纏繞狀態，呈環狀超螺旋結構，即使在高鹼性ph條件下，兩條互補鏈也不會完全分離。
將ph調至中性並有高鹽存在的條件下，變性質粒dna又恢復到原來的構型，而大部分染色體dna和蛋白質難以復性，與細胞碎片、蛋白質、sds等形成不溶性複合物。
通過離心沉澱，細胞破碎、染色體dna及大部分蛋白質等可被出去，而質粒dna及相對分子質量較小的rna仍為可溶狀態。混雜的rna可用rna酶消除，再用酚／氯仿處理，可除去殘留蛋白質。在鹽和乙醇存在的條件下，進一步離心沉澱質粒dna。
質粒提取步驟
3樓：黑科技
操作步驟 ：
請自備 離心管、異丙醇、70%乙醇）
1.取 1-3ml 菌液，分次置於 離心管中，4000rpm 4℃離心 3min，徹底棄除上清。
2. 加入 溶液 a，充分振盪 2min，使菌體充分懸浮，確保無絮塊存在。4000rpm 4℃離心 3min，徹底棄除上清。
3. 加入 200μl 溶液 i 和 5ul 溶液 b，充分振盪 2min，使菌體充分懸浮，確保無絮塊存在。
4. 加入 400μl 溶液 ii，蓋緊管蓋，輕輕顛倒混勻 6 次，注意整個管子的內表面均需與溶液 ii 接觸，室溫放置至溶液清亮。（若 5min 後溶液。
未變清亮，說明菌體過多，應減少菌量。注意混勻手法要溫和，切勿劇烈混合。）
5. 加入 300μl 溶液 iii，蓋緊管蓋，立即輕輕顛倒混勻 8 次，4℃放置 5min。（此步注意要盡快混勻，但手法要溫和）
6. 12000rpm 4℃離心 10min，小心吸出上清，輕移至新的 離心管。（應在離心機自動停轉後取出離心管，以免沉澱懸浮）
7. 加入 600μl 異丙醇，充分混勻，室溫靜置 10min。
8. 12000rpm 4℃離心 10min，小心吸棄上清，再將離心管倒置於吸水紙上，吸去殘餘液體。
9. 加入 700μl 70%乙醇，溫和** 30sec，12000rpm 離心 3min，輕輕棄去上清。
10. 重複步驟 9 操作一次，將離心管倒置乾燥吸水紙上 2min。
11. 將離心管敞口室溫放置 2-5min，晾乾沉澱。
12. 加入 40μl 溶液 iv，溫和** 2min，使沉澱完全溶解。
biog質粒提取，毒性低、純度高，可以做細胞轉染。
中量質粒提取步驟
4樓：亞浩科技
操作步驟。( 請自備 50ml 離心管、20ml 離心管、異丙醇、70%乙醇)
1. 取 50ml 菌液，置於 50ml 離心管中，4000rpm 4℃離心 5 min，徹底棄除上清。
2. 加入 20ml 溶液 a，充分振盪 2min，使菌體充分懸浮，確保無絮塊存在。4000rpm 4℃離心 5min，徹底棄除上清。
3. 加入 2ml 溶液 i 和 40μl 溶液 b，充分振盪 2min，使菌體充分懸浮，確保無絮塊存在。
4. 加入 4ml 溶液 ii，蓋緊管蓋，輕輕顛倒混勻 6 次，注意整個管子的內表面均需與溶液 ii 接觸，室溫放置至溶液清亮。（一般為 4-5min，如 5min 後溶液未變清亮，說明細菌過多，應考慮減少菌液量。
注意混勻手法要溫和，不要劇烈混合）
5. 加入 3ml 溶液 iii，蓋緊管蓋，立即輕輕顛倒混勻 8 次，4℃放置 5min。（此步注意要盡快混勻，但手法要溫和）
6. 10000rpm 4℃離心 15min，小心吸出上清，輕移至新的 20ml 離心管。（應在離心機自動停轉後取出離心管，以免沉澱懸浮）
7. 加入 6ml 異丙醇，充分混勻，室溫放置 10min。
8. 10000rpm 室溫離心 15min，小心吸棄上清，將離心管倒置於吸水紙上，吸去殘餘的液體。（應在離心機自動停轉後取出離心管，以免沉澱。
懸浮）9. 加入 3ml 70%乙醇，溫和** 30sec，10000rpm 離心 10min，輕輕棄去上清。
10. 重複步驟 9，倒置於乾燥的吸水紙上 2min。
11. 將離心管敞口室溫放置 5min，晾乾沉澱。
12. 加入 100μl 溶液 iv，溫和** 2min，使沉澱完全溶解。
注意事項：1、 溶液 ii、溶液 iii 如出現結晶或者沉澱，可在 37℃水浴中加熱幾分鐘溶解，直至液體恢復澄清。
2、 提取的biog質粒量與細菌培養濃度、質粒拷貝數等因素有關。 如所提質粒為低拷貝質粒或者大於 10kb 的大質粒，應加大菌體。
使用量，同時按比例增加溶液 i、溶液 b、溶液 ii、溶液 iii 的用量。
質粒提取的注意事項
5樓：北網域名稱醫
1、利用氯黴素抑制染色體的複製，而不抑制質粒的複製這一特點，在低拷貝質粒（如puc19）的培養過程中新增氯黴素可以大大提高得率。
2、rna的去除，首先是使用rnase消化。在溶液i中加入高濃度的rnasea(100ug/ml)，或者用含25ugrnasea/mlte溶解抽提好的質粒，都可以降低rna殘留，但都不能徹底去除。
3、蛋白質的去除，主要是靠不溶解的k-sds-蛋白質複合物的形成。雖然將中和後的體系置於4c一段時間，可以形成更多的該不溶複合物，從而使蛋白質殘留更少，但實踐證明這樣做並不是必須的，除非是大量抽提。
首先，質粒的提取可分為質粒小提、質粒中提、質粒大提。目前大多數實驗室都選用試劑盒進行提取，可以根據實驗的不同需求，選擇相應的試劑盒。
質粒小提主要用於用於大腸桿菌中質粒dna的小量提取，獲得的質粒可以用於常規的載體構建，一般適用於5ml以下菌液。
而質粒中提，在小提的基礎上可以進一步去除菌液中的內毒素，獲得的質粒可以用於細胞轉染，常規需要菌液量為10-15ml。質粒大提與中提方法相同，可一次抽提100ml-300ml菌液獲得大量質粒。
大提質粒原理
6樓：無雅詩
大提質粒提取主要有鹼裂解法，煮沸裂解法，小量一步提取法等。
鹼裂解法原理：根據共價閉合環狀dna與線性dna的拓撲學結構差異來分離的。在強鹼環境下，細菌的細胞壁和細胞膜被破壞，基因組dna和質粒dna被釋放出來，線性dna雙螺旋結構被破壞而發生變性。
雖然在強鹼的條件下共價閉合環狀質粒dna也會發生變性，但兩條互補鏈仍會互相盤繞，並緊密的結合在一起。當加入的乙醋酸鉀高鹽緩衝液使ph恢復中性時，共價閉合環狀質粒dna復性快，而線性的染色體dna復性緩慢，細菌蛋白質、破裂的細胞壁和變性的染色體dna會相互纏繞成大型複合物，後者被十二烷基硫酸鹽包蓋。
當用鉀離子取代鈉離子時，複合物會從溶液中有效地沉澱下來，離心除去變性劑後，就可以從上清中**復性的質粒dna。
煮沸法裂解：將細菌懸浮於含triton x-100和能消化細胞壁的溶菌酶緩衝液中，然後加熱到100℃使其裂解。加熱除了破壞細胞壁外，還有助於解開dna鏈的鹼基配對，並使蛋白質和染色體dna變性。
但是，閉環質粒dna彼此不會分離，這是因為他們的磷酸二酯骨架具有互相纏繞的拓撲結構，當溫度下降後，閉環dna的鹼基又各自就位，形成超螺旋分子，離心除去變性的染色體核蛋白質，就可從上清中**質粒dna。煮沸裂解法對於小於15kb的小質粒很有效，可用於提取步至lml（小量製備），多至250ml（大量製備）菌液的質粒，並且對大多數的大腸桿菌菌株都適用。
小量一步提取法：由於細菌染色體dna比質粒大得多，受機械力後細菌染色體dna會被震斷成不同大小的線性片段而纏繞附著在細胞碎片上，並發生變性。同樣受機械力質粒dna會變性，機械力消失後復性。
但質粒dna的復性快，仍溶於溶液而細菌染色體dna復性較慢，會形成不溶的網狀結構，通過高速離心可以分離得到質粒dna 。
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