1樓:楊必宇
100-500ng/ul。質粒轉化不少於
bai10的du5次方,zhi連線產物不少於10的6次方。
兩種質粒dao是可以同時進入同乙個
版感受態細胞的,比如構建權腺病毒載體時。但是要求兩種質粒進入同乙個感受態細胞,轉化效率非常低,一般需要電轉或者其他的特殊處理。增加收菌次數,相對提高了質粒的量,這樣的話裂解液的量可以適當增加;裂解要充分,變性和復性按說明應該是不超過5分鐘,合理控制時間。
2樓:匿名使用者
質粒還是連線產物 質粒的話隨便一點點就可以了 多大濃度的都加1ul吧
3樓:匿名使用者
一般來說10~100ng都可抄
以,不過其襲實我們真正做的時候bai就是du不管濃度多大(濃度約zhi在100ng/ul以上),都是取dao1ul的質粒溶液,稀釋10倍,就是10ul,加入到100ul的感受態細胞裡~每次都這樣做,沒有問題
感受態細胞製備時對菌體細胞的濃度大小有要求嗎,是不
4樓:匿名使用者
(1)質粒dna的質量和濃度:
用於轉化的質粒dna應主要是超螺旋態的,轉化率與外源dna的濃度在一定範圍內成正比,但當加入的外源dna的量過多或體積過大時,則會使轉化率下降。一般地,dna溶液的體積不應超過感受態細胞體積的5%,1ng的cccdna即可使50ul的感受態細胞達到飽和。對於以質粒為載體的重組分子而言,分子量大的轉化效率低,實驗證明,大於30kb的重組質粒將很難進行轉化。
此外,重組dna分子的構型與轉化效率也密切相關,環狀重組質粒的轉化率較分子量相同的線性重組質粒高10~100倍,因此重組dna大都構成環狀雙螺旋分子。
(2)感受態細胞的質量:
所用的cacl2等試劑均需是最高純度的,並用最純淨的水配製,最好分裝儲存於4°C
(3)細胞的生長狀態和密度
最好從-70°C或-20°C甘油儲存的菌種中直接轉接用於製備感受態細胞的菌液。不要用已經過多次轉接,及貯存在4°C的培養菌液。細胞生長密度以每毫公升培養液中的細胞數在5×107個左右為佳。
即應用對數期或對數生長前期的細菌,可通過測定培養液的od600控制。對tg1菌株,od600為0.5時,細胞密度在5×107個/ml左右。(應注意od600值與細胞數之間的關係隨菌株的不同而不同)。
密度過高或不足均會使轉化率下降。
(二)感受態細胞轉化中的影響:
整個操作過程均應在無菌條件下進行,所用器皿,如離心管,移液槍頭等最好是新的,並經高壓滅菌處理。所有的試劑都要滅菌,且注意防止被其它試劑、dna酶或雜dna所汙染,否則均會影響轉化效率或雜dna的轉入。整個操作均需在冰上進行,不能離開冰浴,否則細胞轉化率將會降低。
乙個感受態細胞能轉化進去多少質粒?
5樓:獨特的
可有數個拷貝的質粒進入同一細胞。但由於質粒不相容性,有些質粒會消失
用的哪種方法,電轉化還是化學轉化?
這個可能性很多,質粒質量,感受態細胞質量甚至質粒提取的試劑盒質量都有影響
大腸桿菌感受態細胞製備時的cacl2濃度到底是多少
6樓:匿名使用者
(1)質粒dna的質量和濃度: 用於轉化的質粒dna應主要是超螺旋態的,轉化率與外源dna的濃度在一定範圍內成正比,但當加入的外源dna的量過多或體積過大時,則會使轉化率下降。一般地,dna溶液的體積不應超過感受態細胞體積的5%,1ng的cccdna即可使50ul的感受態細胞達到飽和。
對於以質粒為載體的重組分子而言,分子量大的轉化效率低,實驗證明,大於30kb的重組質粒將很難進行轉化。此外,重組dna分子的構型與轉化效率也密切相關,環狀重組質粒的轉化率較分子量相同的線性重組質粒高10~100倍,因此重組dna大都構成環狀雙螺旋分子。 (2)感受態細胞的質量:
所用的cacl2等試劑均需是最高純度的,並用最純淨的水配製,最好分裝儲存於4°C (3)細胞的生長狀態和密度 最好從-70°C或-20°C甘油儲存的菌種中直接轉接用於製備感受態細胞的菌液。不要用已經過多次轉接,及貯存在4°C的培養菌液。細胞生長密度以每毫公升培養液中的細胞數在5×107個左右為佳。
即應用對數期或對數生長前期的細菌,可通過測定培養液的od600控制。對tg1菌株,od600為0.5時,細胞密度在5×107個/ml左右。(應注意od600值與細胞數之間的關係隨菌株的不同而不同)。
密度過高或不足均會使轉化率下降。 (二)感受態細胞轉化中的影響: 整個操作過程均應在無菌條件下進行,所用器皿,如離心管,移液槍頭等最好是新的,並經高壓滅菌處理。
所有的試劑都要滅菌,且注意防止被其它試劑、dna酶或雜dna所汙染,否則均會影響轉化效率或雜dna的轉入。整個操作均需在冰上進行,不能離開冰浴,否則細胞轉化率將會降低。
大腸桿菌感受態細胞製備時的cacl2濃度到底是多少呢?
7樓:月神
孫小刀3個月前覺得大腸桿菌感受態細胞的製備實驗簡單一般實驗室喜歡一下製備大量感受態儲備。。。所以工作量比較大,製作過程到處都有,大多數人也是用化學法做。注意無菌,低溫等試驗環境,最主要是耐心。。。
8樓:廉聽雲薄朝
(1)質粒dna的質量和濃度:
用於轉化的質粒dna應主要是超螺旋態的,轉化率與外源dna的濃度在一定範圍內成正比,但當加入的外源dna的量過多或體積過大時,則會使轉化率下降。一般地,dna溶液的體積不應超過感受態細胞體積的5%,1ng的cccdna即可使50ul的感受態細胞達到飽和。對於以質粒為載體的重組分子而言,分子量大的轉化效率低,實驗證明,大於30kb的重組質粒將很難進行轉化。
此外,重組dna分子的構型與轉化效率也密切相關,環狀重組質粒的轉化率較分子量相同的線性重組質粒高10~100倍,因此重組dna大都構成環狀雙螺旋分子。
(2)感受態細胞的質量:
所用的cacl2等試劑均需是最高純度的,並用最純淨的水配製,最好分裝儲存於4°C
(3)細胞的生長狀態和密度
最好從-70°C或-20°C甘油儲存的菌種中直接轉接用於製備感受態細胞的菌液。不要用已經過多次轉接,及貯存在4°C的培養菌液。細胞生長密度以每毫公升培養液中的細胞數在5×107個左右為佳。
即應用對數期或對數生長前期的細菌,可通過測定培養液的od600控制。對tg1菌株,od600為0.5時,細胞密度在5×107個/ml左右。(應注意od600值與細胞數之間的關係隨菌株的不同而不同)。
密度過高或不足均會使轉化率下降。
(二)感受態細胞轉化中的影響:
整個操作過程均應在無菌條件下進行,所用器皿,如離心管,移液槍頭等最好是新的,並經高壓滅菌處理。所有的試劑都要滅菌,且注意防止被其它試劑、dna酶或雜dna所汙染,否則均會影響轉化效率或雜dna的轉入。整個操作均需在冰上進行,不能離開冰浴,否則細胞轉化率將會降低。
感受態細菌的名詞解釋，感受態細胞（細菌），什麼是感受態細胞
經過適當處理後容易接受外來dna進入的細菌。如大腸桿菌經cacl2處理，就成為容易受質粒dna轉化的細胞。感受態細胞 細菌 什麼是感受態細胞 野生型e.coli並不容易轉化，這是由於細菌產生一種酶能迅速降解進入的外源dna。經過多年的努力，科學家們發現了一種方法可以增加細胞吸收外源dna的效率。那就...
為什麼大腸桿菌感受態細胞製備和轉化
轉化實驗用bai液態的lb是為了讓細du胞恢復培 zhi養,也有人稱 之為讓其孵育,質dao粒或其他經專在液態lb中恢復屬培養後再塗佈平板 固態培養基 是為了分散開,以培養單轉殖。一般經37度倒置培養12 16h後,就可以看到有單個轉殖長出,就可挑取了。如何製備大腸桿菌感受態細胞 大腸桿菌感受態細胞...
質粒轉化後下一步做什麼,做質粒轉化感受態,加質粒後需不需要混勻感受
一般肯定是要搖菌,擴增培養,然後凍存菌種的。這之後可以用細菌表達轉染的質粒。你想做什麼就做什麼啊,根據你的目的。質粒的轉換的方法有哪些?質粒轉化後如何篩選?轉化的方法 來最常用的是感受態法,包源括熱激和電轉bai 化等,轉染不是轉化du,這是不同的zhi概念。轉化dao後,可以根據質粒上帶有的某種特...