1樓:網友
mtt法?又稱mtt比色法,是一種檢測細胞存活和生長的方法。其檢測原理為活細胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性mtt還原為水不溶性的藍紫色結晶甲瓚(formazan)並沉積在細胞中,而死細胞無此功能。
二甲基亞碸(dmso)能溶解細胞中的甲瓚,用酶聯免疫檢測儀在490nm波長處測定其光吸收值,可間接反映活細胞數量。在一定細胞數範圍內,mtt結晶形成的量與細胞數成正比。該方法已廣泛用於一些生物活性因子的活性檢測、大規模的抗腫瘤藥物篩選、細胞毒性試驗以及腫瘤放射敏感性測定等。
它的特點是靈敏度高、經濟。
缺點:由於mtt經還原所產生的甲瓚產物不溶於水,需被溶解後才能檢測。這不僅使工作量增加,也會對實驗結果的準確性產生影響,而且溶解甲瓚的有機溶劑對實驗者也有損害。
細胞活力測定常用的簡便方法是
2樓:渴侯含巧
根據每個細胞有一定的重量而設計的。
它可以用於單細胞、多細胞以及絲狀體微生物生長的測定。將一定體積的樣品通過離心或過濾將菌體分離出來,經洗滌,再離心後直接稱重,求出溼重,如果是絲狀體微生物,過濾後用濾紙吸去菌絲之間的自由水,再稱重求出溼重。
不論是細菌樣品還是絲狀菌樣品,可以將它們放在已知重量的平皿或燒杯內,於105℃烘乾至恆重,取出放入乾燥器內冷卻,再稱量,求出微生物乾重。如果要測定固體培養基上生長的放線菌或絲狀真菌,可先加熱至50℃,使瓊脂熔化,過濾得菌絲體,再用50℃的生理鹽水洗滌菌絲,然後按上述方法求出菌絲體的溼重或乾重。
除了乾重、溼重反映細胞物質重量外,還可以通過測定細胞中蛋白質或dna的含量反映細胞物質的量。蛋白質是細胞的主要成分,含量也比較穩定,其中氮是蛋白質的重要組成元素。從一定體積的樣品中分離出細胞,洗滌後,按凱氏定氮法測出總氮量。
蛋白質含氮量為16%,細菌中蛋白質含量佔細菌固形物的50%一80%,一般以65%為代表,有些細菌則只佔13%一14%,這種變化是由菌齡和培養條件不同所產生的。
因此總含氮量與蛋白質總量之間的關係可按下列公式計算:蛋白質總量=含氮量×核酸dna是微生物的重要遺傳物質,每個細菌的dna含量相當恆定,平均為。
因此從一定體積的細菌懸液中所含的細菌中提取dna,求得dna含量,再計算出這一定體積的細菌懸液所含的細菌總數。
細胞活力即在細胞群體中總有一些因各種原因而死亡的細胞,總細胞中活細胞所佔的百分比。
在細胞群體中總有一些因各種原因而死亡的細胞,總細胞中活細胞所佔的百分比叫做細胞活力。
檢測意義。由組織中分離細胞檢查活力以瞭解分離過程對細胞是否有損傷作用。復甦後的細胞也要檢查細胞活力,瞭解凍存和復甦的效果。
鑑定方法。染色排除法(最常用)
臺盼藍法:死細胞染成藍色,活細胞不著色。
苯胺黑法:死細胞染成黑色,活細胞不著色。
伊紅y法:螢光排除法:
生活力強的細胞能發出強烈的黃綠色螢光;生活力弱的細胞發出螢光也較弱;死亡細胞無螢光。
細胞內酶與特定試劑的顯色反應:
mtt比色實驗:琥珀酸脫氫酶可使mtt分解產生蘭色結晶狀甲贊顆粒積於細胞內和細胞周圍,其量與細胞數呈正比,也與細胞活力呈正比。
轉殖形成試驗。
計算公式。活細胞率 =(細胞總數-死細胞數)/ 細胞總數 x 100%
3樓:遲到要你命
痤瘡是多種因素導致的毛囊皮脂腺慢性炎症性**病。建議平時多用溫水洗臉,多吃青菜和水果,多運動,生活作息要正常,要早睡早起。然後不要吃上火煎炸的食物。
細胞活性檢測的方法有多少種 ?每種的原理是什麼?
4樓:匿名使用者
在目前的細胞活性檢測方法中,mtt法是較早且較為經典的方法。但是,由於mtt法形成的甲物是非水溶性的,需要加有機溶劑溶解,這不僅增加了研究人員的工作量,也給實驗帶來了一定的誤差。在這裡我們向大家介紹一種國外最新檢測方法—cck-8法,它具有方便、靈敏、快速、無放射性、重複性好的特點。
現在已廣泛用於細胞增殖檢測、細胞毒性檢測、藥物篩選、藥敏試驗等。
另外還將向大家介紹幾種氧化應激和蛋白質抗體標記的新方法。
內容:1、新型細胞活性檢測方法介紹。
2、國外氧化應激測定方法介紹。
3、蛋白質抗體標記的新方法介紹。
原理恕在下不知。
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