電泳條帶清晰為什麼卻無法測序

1樓:北京索萊寶科技****

你知道你的目的片段的序列嗎?看是否有str位點?如果有且為雜合子的版話就無法直接用pcr產物測權序,但可以通過**體解決。

瓊脂糖凝膠電泳的解析度較低,所以即使條帶清晰,相差幾個到十幾個鹼基也是無法區分的。還有就是你的測序引物是你的pcr引物嗎?可以考慮設計專門的測序引物來測序,這樣就可以避免因為非特異擴增而導致的測序結果較亂。

如果知道了目的序列,就拿目的序列來設計,如果不知道,那就看你的現在的測序結果,找你的說法,應該是開始的鹼基測序結果較好,那麼你可以通過這些測序較好的鹼基序列來設計測序引物。

另外,你拿到測序結果了嗎?如果拿到了,那麼就看你的測序峰形圖,如果存在str位點,測序應該是到乙個位置後開始出現雜峰,但前面的峰較好,雜峰也是比較有規律的,至少剛開始出現雜峰的位置是,你可以看到兩個平行的峰,他們縫間距是比較固定的,這樣通常就是str位點了。通常的解決辦法就是**體。

(僅供參考)

質粒連線目的片段,菌液pcr後電泳有目的條帶,為什麼送菌液測序結果是空載體呢 ?

2樓:exo不偷井蓋

1、你bai

的實驗目的是什麼? 2、如果du是克zhi隆,連線t載體後不用酶dao

切,直接轉化菌專落pcr檢測有目屬

的條帶的話送樣測序即可。 3、如果是做表達載體構建,pcr產物和質粒dna酶切後與沒有酶切的在同一塊膠上電泳,如果兩個酶切位點很近,幾乎看不到被切下來的小片段條帶(太小,早就跑出去了)。你要是怕酶切不完全就多稍微加點酶,切的時間長一點。

4、關於酶切產物有幾條帶視酶切效果而定,酶切完全則兩條,一大一小(小的可能看不到,原因見3、)酶切不完全則三條帶,一大一小及未切開的pcr產物;質粒的話可能還多一條環狀分子和線狀分子的區別。

3樓:落葉來也

確定有目的條帶麼?

如果確定連上了,可能就是挑菌的時候不是單菌落,重新挑,或者原點再取點,塗佈或者劃線。

pcr後電泳是特異性條帶,但測序總是出現結合問題.怎麼辦

4樓:北京索萊寶科技****

第一序列多長?

第二、可以考慮轉殖測序,這樣不容易產生結合。