1樓:匿名使用者
看標準曲線是否反映出了標準物質的真實濃度
怎麼判斷實時螢光定量pcr標準曲線是否準確
2樓:南京金益柏生物科技****
看標準曲線是否反映出了標準物質的真實濃度
怎麼判斷實時螢光定量pcr標準曲線是否準確
3樓:匿名使用者
看標準曲線是否反映出了標準物質的真實濃度
實時螢光定量pcr,溶解曲線怎麼判斷是否為目的產物
4樓:南京金益柏生物科技****
根據曲線初步判斷,整個實驗設計還可以!你做相對定量嗎,將樣品結果與對照看看基因表達量分析就可以了! 如果絕對定量,需要進一步實驗吧!
5樓:為青生物
溶解曲線的單峰明顯,橫座標在80度以上,一般就是pcr產物
為什麼螢光定量pcr可以準確定量
6樓:匿名使用者
準確定量
實時定量的引物設計要求比較高,可以按普通引物設計的方法來做,但是設計時要注意擴增的片段不能太大,最好在250bp-100bp之間。同時要保證這對引物有絕對的特異性,因為要是產生非特異性擴增的話,就不能準確的計量模板量了,這樣就失去了實時定量的意義了
用已知濃度的dna樣本(通常是質粒)梯度稀釋成一系列的樣本。做實驗的時候,這些標準品和待測樣本加在同樣一塊96孔盤的不同孔內。一起做pcr。
標準品的螢光強度和已知的濃度作圖,可以得到一條標準曲線。而待測樣本的螢光強度測出以後,就可以在標準曲線上算出樣本濃度了。
實時螢光定量pcr曲線怎麼分析
7樓:龍鳳油洺月
看螢光背景;
看擴增曲線形態(s);
看ct值;
靠擴增效率、
如何判定螢光定量結果的真實性
8樓:北京厚德交通科技****
如何判定bai螢光定
量結果的真實性du
螢光定量pcr(real-time pcr)是目zhi前基因表dao達定量分析的重要檢測手段專,已經為屬
越來越多的研究者所採用。「好的開始是成功的一半」,perrez-novo等(perrez- novoet al., 2005)曾報道獲得高質量rna對後續pcr定量結果的準確性是非常重要的,而高質量rna是獲得高質量cdna的必要條件,所以本文著重介紹一下如何獲得高質量cdna。
高質量cdna應具備以下幾個特點:無基因組dna殘留、能準確反應出樣本真實的轉錄情況和資訊完整且濃度適當等特點。
高質量cdna應保證無基因組dna殘留
在提取rna的過程中,常常會有基因組dna的殘留,從而導致實驗結果的不準確性或假陽性結果的出現。 2023年,nature protocol的一篇關於螢光定量pcr實驗研究的文章1中明確指出,在合成cdna第一鏈之前應去除基因組dna殘留,以免cdna中有基因組dna的存在,影響高靈敏度的螢光定量pcr實驗結果。
9樓:匿名使用者
螢光定du量pcr(real-time pcr)是zhi目前基因表dao達定量分析的重要檢測回手段,已經為答越來越多的研究者所採用。「好的開始是成功的一半」,perrez-novo等(perrez- novoet al., 2005)曾報道獲得高質量rna對後續pcr定量結果的準確性是非常重要的,而高質量rna是獲得高質量cdna的必要條件,所以本文著重介紹一下如何獲得高質量cdna。
高質量cdna應具備以下幾個特點:無基因組dna殘留、能準確反應出樣本真實的轉錄情況和資訊完整且濃度適當等特點。
高質量cdna應保證無基因組dna殘留
在提取rna的過程中,常常會有基因組dna的殘留,從而導致實驗結果的不準確性或假陽性結果的出現。 2023年,nature protocol的一篇關於螢光定量pcr實驗研究的文章1中明確指出,在合成cdna第一鏈之前應去除基因組dna殘留,以免cdna中有基因組dna的存在,影響高靈敏度的螢光定量pcr實驗結果:
螢光定量PCR標準曲線,做實時螢光定量PCR實驗時,為什麼做標準曲線
具體情況要看你做的這個基因在兩個物種中的同源性。如果同源性很高,可以用同一對引物,回同一條探答 針的話,那我們就認為它在realtimepcr中的擴增效率是一樣的,標準曲線只要做一次就行了,對資料分析不會有影響 我要用ct法做螢光定量pcr,請問需要做標準曲線嗎 最好是做標準曲線,要看看擴增效率的....
實時定量PCR的結果分析實時螢光定量PCR的結果該怎樣分析？
sybergreen可以和所有核酸結合，沒有特異性。所以要保證特異性的話，最好用其他的方法。擴增體系中加入模板dna的體積，比如同時10微公升的體系，對照組加1微公升dna，實驗組加2微公升dna，則實驗組的加樣量是對照組的2倍。看ct值是分析螢光定量pcr最直觀的乙個資料，ct值一般在35左右就失...
實時螢光定量pcr技術原理是什麼
聚合酶鏈式反應 pcr 可對特定核苷酸片斷進行指數級的擴增 在擴增反應結束之後,版我們可以通過凝膠電泳權的方法對擴增產物進行定性的分析,也可以通過 放射性核素摻入標記後的光密度掃瞄來進行定量的分析 無論定性還是定量分析,分析的都是 pcr 終產物。但是在許多情況下,我們所感興趣的是未經 pcr 訊號...