1樓：匿名使用者
你都有標準曲線了。就不用做delta deltact了，直接用樣本的ct值帶入標準曲線就可以了。
delta deltact只用於相對值的測量。每乙個delta代表ct值相減一次。第一次是目標基因對照組和實驗組的ct值相減。第二次是內參基因對照組和實驗組ct值相減。
得到的兩個數值算為2的xx次方，就是相差了多少倍。再用目的基因的倍數除以內參基因的倍數，最後得到實際的相差倍數。
我想問一下螢光定量pcr法用2-△△ct計算相對定量的問題
2樓：
做了乙個實驗，內部參考電壓可以得到幾個ct值，會得到多個目標基因。在這種情況下，根據ct值的平均值，將得到的比率（相對量）。
實驗肯定不是唯一的一次，至少重複3次。這將是乙個倍數的3個或更多，得到。 3個以上的值，你可以計算平均值和標準偏差的。
3樓：塔渟盛淑賢
你一次實驗做的資料，內參可以得到幾個ct值，目的基因也會得到幾個。這樣的話，根據平均的ct值，就會得到乙個倍數(相對量)。
實驗肯定不會只做一次吧，至少重複3次以上。這樣就會得到3個以上的倍數了。3個以上的數值就可以算均數和標準差了。
我想問一下螢光定量pcr法用2-△△ct計算相對定量時結果的標準差是如何計算的
4樓：匿名使用者
這個很簡單啊。你做了一次實驗，得到的樣本做了一次pcr，得到了一次的相對定量（設對照組為1）。然後重新做實驗，再做pcr，又得到一組，這樣至少重複3次，就有3組相對定量了。計算標準差
對照組的標準差：取對照組的平均ct值設為1， 3次試驗的ct值根據2-△△ct計算相對量，可以算出對照組的標準差。
螢光定量pcrct值每次重複相差多少
5樓：
如果有標準曲線，按照標準曲線計算。
一般都是相對量。則用delta delta ct方法來計算。舉例如下：
對照組基因a的ct值為20， 內參（比如βactin)ct值15。實驗組基因a ct值18，內參ct值14。 首先算加樣量：
delta ct=15-14=1。2的1次方是2。也就是說。。
關於實時螢光pcr檢測2-△△ct計算結果？
6樓：塗含秀扶紹
這個很簡單啊。你做了一次實驗，得到的樣本做了一次pcr，得到了一次的相對定量（設對照組為1）。然後重新做實驗，再做pcr，又得到一組，這樣至少重複3次，就有3組相對定量了。計算標準差
對照組的標準差：取對照組的平均ct值設為1，
3次試驗的ct值根據2-△△ct計算相對量，可以算出對照組的標準差。
求助關於螢光定量pcr的ct值問題
7樓：林顧姝
如果有標準曲線，按照標準曲線計算。
一般都是相對量。則用delta delta ct方法來計算。舉例如下：
對照組基因a的ct值為20， 內參（比如βactin)ct值15。實驗組基因a ct值18，內參ct值14。
首先算加樣量：delta ct=15-14=1。2的1次方是2。也就是說實驗組的加樣量是對照組的2倍。
基因a: delta ct=20-18=2。2的2次方是4。也就是說基因a的量在實驗組是對照組的4倍。但是由於加樣量是2倍，所以4處以2=2，最後的相對量是2倍。
幾點注意：
1。必須確定擴增的特異性
2。 只有相同目標的ct值才能相減（擴增效率有可能不同）
3。 2的某次方只是理論值，實際擴增效率低於2。
4。 最好不用syber green
8樓：琦桂花富羅
看了你空間裡的溶解曲線，你可以看到溶解峰的溫度都很低，全在80以下，你擴出來的東西多半只是引物，你跑定量的時候有做ntc的孔嗎，如果有做，可以對照ntc組和加了模板的組，溶解峰還是一樣的話，那你擴出來的產物100%是引物了。
再有，你的擴增曲線問題，ct太了，一般做定量認為ct=25時，是乙個模板擴出來的，所以當大於25擴出來的結果都不可信。
還有，你反轉錄的時候rna加多少，2微克？，反轉錄體系是多少,20微公升？反轉錄之後按照多少比例稀釋，1比4？
總之，問題可以再問詳細一點，也可以直接hi我
如果做過ntc那溶解峰就沒問題了，而且都很單一，特異性蠻好的。沒稀釋的cdna做的定量，ct大於30？你p的什麼基因呢，表達量也太低了吧，內參的ct呢，也是這麼低嗎
相對定量pcr中的對照組指什麼？2-△△c中處理前和處理後什麼意思
9樓：匿名使用者
我想你說的「對照樣品」應該是用於製作標準曲線的標準品（常用質粒構建的重組dna），稀釋4-5個梯度，可以做標準曲線。所謂雙曲線，就是用這個所謂的「對照樣品dna」，乙個用來做目的基因的標準曲線，乙個用來做內參基因的標準曲線。
2-△△c中處理前和處理後，我沒有明白。
10樓：虢善問木
螢光定量pcr會加入帶有螢光基團的探針，探針是能和目的基因結合的單鏈dna，如果合成雙鏈dna後，螢光基團就會啟用發光，所以實時檢測反應物的螢光強度，反應的就是雙鏈dna的濃度，由於合成雙鏈dna的速率和模板濃度有關，所以和參考曲線比較以後是可以計算出模板的相對濃度，當模板是訊號rna是，其反應的就是基因發達的量。
請問：做螢光定量pcr時，△△ct值是什麼意思，它的計算公式是什麼？ 20
11樓：禾鳥
△△ct是螢光定量計算公式的簡化形式，用於比較不同樣品之間的差別或變化比率。
ct=-1/lg(1+ex)*lgx₀+lgn/lg(1+ex)，其中，n為擴增反應的迴圈次數，x₀為初始模板量，ex為擴增效率，n為螢光擴增訊號達到閾值強度時擴增產物的量。△ct(n)=ct（目的基因）-ct（內參基因）；△△ct(n)=△ct(n)-△ct(1)。
起始拷貝數越多，ct值越小。利用已知起始拷貝數的標準品可作出標準曲線，其中橫座標代表起始拷貝數的對數，縱座標代ct值。因此，只要獲得未知樣品的ct值，即可從標準曲線上計算出該樣品的起始拷貝數。
擴充套件資料
螢光定量pcr的原理：
螢光定量pcr技術：在pcr反應體系中加入螢光基團，通過螢光訊號不斷累積而實現實時監測pcr全程，然後通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。在實時螢光定量pcr中，對全程pcr擴增過程進行實時檢測，根據反應時間和螢光訊號的變化可以繪製成一條曲線。
實時螢光定量常用的螢光化學分類有sybr green i法和tag man探針法。
ct值：c代表cycle，t代表threshold，ct值的含義是每個反應管內的螢光訊號到達設定的域值時所經歷的迴圈數。
12樓：一生乙個乖雨飛
△△ct這是相對螢光定量的乙個計算公式的簡化形式，用於比較不同樣品之間的差別或變化比率。
ct= -k lgx0+ b（線性方程）用這個方程可以通過ct值算出樣品的起始濃度
斜率=-1/lg(1+e)
擴增效率e=1, 斜率=-3.32
擴增效率範圍：90%-110%
斜率範圍：-3.1和-3.59之間
例如，想看a基因和b基因在某細胞系中表達量的差別，選取18s作為內參基因，就用a基因的ct值減去18s的ct值，得到△ct1，用b基因的ct值減去18s的ct值得到△ct2，然後用△ct1-△ct2=△△ct，而a，b基因的表達量差別為2（-δδct）次方。
當然這計算方法是基於螢光定量的數學計算模型簡化來的，平時使用沒什麼問題，如果兩個目的基因的擴增效率不一樣，這個計算方法是不能用的。
13樓：匿名使用者
ct= -k lgx0+ b（線性方程）用這個方程可以通過ct值算出樣品的起始濃度
斜率=-1/lg(1+e)
擴增效率e=1, 斜率=-3.32
擴增效率範圍：90%-110%
斜率範圍：-3.1和-3.59之間
△△ct這是相對螢光定量的乙個計算公式的簡化形式，用於比較不同樣品之間的差別或變化比率
例如，想看a基因和b基因在某細胞系中表達量的差別，選取18s作為內參基因，就用a基因的ct值減去18s的ct值，得到△ct1，用b基因的ct值減去18s的ct值得到△ct2，然後用△ct1-△ct2=△△ct，而a，b基因的表達量差別為2（-δδct）次方，當然這中計算方法是基於螢光定量的數學計算模型簡化來的，平時隨便用用沒什麼問題，如果你的兩個目的基因的擴增效率不一樣，這個計算方法是不能用的。
14樓：匿名使用者
我這邊有關於△△ct法的相關文獻以及推導公式，方便的話可以給我留一下你的郵箱
螢光定量pcr，實驗組和對照組的目的基因ct值非常相近，兩組內參基因的ct值相差5左右，正常嗎？
15樓：何曼婷囖
回答如下：
不正常。螢光定量pcr通過以內參基因作為標準進行相對定量，即眾所周知的2–δδct 法，（前提是要求在所有測試樣本中恆定表達的已知參照基因，而且表達水平不受研究條件及處理方式的影響）。
如果實驗組和對照組的目的基因ct值非常接近（前提是cdna稀釋的倍數一致）， 說明二者的目的基因無明顯變化呀。
基因作用：
基因有控制遺傳性狀和活性調節的功能，基因通過複製把遺傳資訊傳遞給下一代,並通過控制酶的合成來控制代謝過程,從而控制生物的個體性狀表現。基因還可以通過控制結構蛋白的成分,直接控制生物性狀。
生物體細胞中的dna分子上有很多基因,但並不是每一基因的特徵都表現出來。即使是由同一受精卵發育分化而來的同一人體不同組織中的細胞,如肌肉細胞、肝臟細胞、骨細胞、神經細胞、紅細胞和胃黏膜細胞。
細胞核中的基因在細胞的一生中並非始終處於活性狀態,它們有的處於轉錄狀態,即活性狀態,這時基因開啟,有的處於非轉錄狀態,即基因關閉。
螢光定量PCR標準曲線,做實時螢光定量PCR實驗時,為什麼做標準曲線
具體情況要看你做的這個基因在兩個物種中的同源性。如果同源性很高,可以用同一對引物,回同一條探答 針的話,那我們就認為它在realtimepcr中的擴增效率是一樣的,標準曲線只要做一次就行了,對資料分析不會有影響 我要用ct法做螢光定量pcr,請問需要做標準曲線嗎 最好是做標準曲線,要看看擴增效率的....
實時定量PCR的結果分析實時螢光定量PCR的結果該怎樣分析？
sybergreen可以和所有核酸結合，沒有特異性。所以要保證特異性的話，最好用其他的方法。擴增體系中加入模板dna的體積，比如同時10微公升的體系，對照組加1微公升dna，實驗組加2微公升dna，則實驗組的加樣量是對照組的2倍。看ct值是分析螢光定量pcr最直觀的乙個資料，ct值一般在35左右就失...
各種螢光定量pcr儀的pcr管能互用嗎
axygen生產很多 型別的pcr管,很多pcr儀都能在他家找到合適的管子。我們學院專bio rad rotor gene還有takara的機子都用的axygen的耗材。不過屬abi的就得注意了,聽說相容性是最差的。我們實驗室用的是abi的step one,當時也想找替代的耗材,畢竟原廠的很貴。但是...