1樓：匿名使用者
看你的實驗需要，如果你需要比較不同批次的實驗樣品之間的量，最好還是手動調一下這些值
螢光定量pcr中關於閾值的設定是否會影響ct值？
2樓：匿名使用者
閾值和基線的設定肯定會影響ct值，你可以採用每次反應完後軟體自己選定的閾值。你也可以手動調整，但是如果你是相同的模板，做不同反應，那你必須使兩次實驗的閾值和基線調到相同。使用相同的標準品，才能減小不同批次反應的誤差。
3樓：
閾值和基線的設定是會影響ct值的，一般儀器會自動對基線和閾值進行優化，一般選用儀器上的設定就可以了。
但有些時候也需要調整，主要根據標準曲線上的斜率，擴增效率和r2值進行調整，將斜率調到合適的位置即可。
當然也可以在每次進行實驗時設定1-2個內參，根據內參調整引數。
螢光定量pcr，機器自動給出的閾值線很低
4樓：阿魯巴星人
閾值最好取在直線上公升的區域段，即呈對數增長的那一段，不然的話，訊號不穩，而且ct值也不准。
那條閾值的線可以拖動的，你自己調整一下。（最後計算出來的結果和閾值的大小沒有關係，所以你膽子大點，下手吧~）
5樓：匿名使用者
根據曲線只要在幾何上公升的起始段以上就行，所以有時候你可以自己拖動那根線也不是不可以
實時螢光定量pcr中，樣本螢光迴圈閾值ct的設定有何意義
6樓：南京金益柏生物科技****
閾值和基線的設定肯定會影響ct值，你可以採用每次反應完後軟體自己選定的閾值。你也可以手動調整，但是如果你是相同的模板，做不同反應，那你必須使兩次實驗的閾值和基線調到相同。使用相同的標準品，才能減小不同批次反應的誤差。
螢光定量pcr 為什麼會有閾值
7樓：請叫我激動哥
閾值和基線的設定肯定會影響ct值，你可以採用每次反應完後軟體自己選定的閾值。
你也可以手動調整，但是如果你是相同的模板，做不同反應，那你必須使兩次實驗的閾值和基線調到相同。
使用相同的標準品，才能減小不同批次反應的誤差。
螢光定量pcr檢測時的ct值怎麼確定的
8樓：為青生物
找個教程看看。
先設定基線，機器會自動設定，這個一般不用改。
然後設定閾值，閾值設定的不同，ct值會相差比較大
螢光定量pcr的結果（ct值）怎麼分析
9樓：匿名使用者
目的基因螢光達到閾值時的迴圈數～ct值越低代表起始模板數量越大～
請問：做螢光定量pcr時，△△ct值是什麼意思，它的計算公式是什麼？ 20
10樓：禾鳥
△△ct是螢光定量計算公式的簡化形式，用於比較不同樣品之間的差別或變化比率。
ct=-1/lg(1+ex)*lgx₀+lgn/lg(1+ex)，其中，n為擴增反應的迴圈次數，x₀為初始模板量，ex為擴增效率，n為螢光擴增訊號達到閾值強度時擴增產物的量。△ct(n)=ct（目的基因）-ct（內參基因）；△△ct(n)=△ct(n)-△ct(1)。
起始拷貝數越多，ct值越小。利用已知起始拷貝數的標準品可作出標準曲線，其中橫座標代表起始拷貝數的對數，縱座標代ct值。因此，只要獲得未知樣品的ct值，即可從標準曲線上計算出該樣品的起始拷貝數。
擴充套件資料
螢光定量pcr的原理：
螢光定量pcr技術：在pcr反應體系中加入螢光基團，通過螢光訊號不斷累積而實現實時監測pcr全程，然後通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。在實時螢光定量pcr中，對全程pcr擴增過程進行實時檢測，根據反應時間和螢光訊號的變化可以繪製成一條曲線。
實時螢光定量常用的螢光化學分類有sybr green i法和tag man探針法。
ct值：c代表cycle，t代表threshold，ct值的含義是每個反應管內的螢光訊號到達設定的域值時所經歷的迴圈數。
11樓：一生乙個乖雨飛
△△ct這是相對螢光定量的乙個計算公式的簡化形式，用於比較不同樣品之間的差別或變化比率。
ct= -k lgx0+ b（線性方程）用這個方程可以通過ct值算出樣品的起始濃度
斜率=-1/lg(1+e)
擴增效率e=1, 斜率=-3.32
擴增效率範圍：90%-110%
斜率範圍：-3.1和-3.59之間
例如，想看a基因和b基因在某細胞系中表達量的差別，選取18s作為內參基因，就用a基因的ct值減去18s的ct值，得到△ct1，用b基因的ct值減去18s的ct值得到△ct2，然後用△ct1-△ct2=△△ct，而a，b基因的表達量差別為2（-δδct）次方。
當然這計算方法是基於螢光定量的數學計算模型簡化來的，平時使用沒什麼問題，如果兩個目的基因的擴增效率不一樣，這個計算方法是不能用的。
12樓：匿名使用者
ct= -k lgx0+ b（線性方程）用這個方程可以通過ct值算出樣品的起始濃度
斜率=-1/lg(1+e)
擴增效率e=1, 斜率=-3.32
擴增效率範圍：90%-110%
斜率範圍：-3.1和-3.59之間
△△ct這是相對螢光定量的乙個計算公式的簡化形式，用於比較不同樣品之間的差別或變化比率
例如，想看a基因和b基因在某細胞系中表達量的差別，選取18s作為內參基因，就用a基因的ct值減去18s的ct值，得到△ct1，用b基因的ct值減去18s的ct值得到△ct2，然後用△ct1-△ct2=△△ct，而a，b基因的表達量差別為2（-δδct）次方，當然這中計算方法是基於螢光定量的數學計算模型簡化來的，平時隨便用用沒什麼問題，如果你的兩個目的基因的擴增效率不一樣，這個計算方法是不能用的。
13樓：匿名使用者
我這邊有關於△△ct法的相關文獻以及推導公式，方便的話可以給我留一下你的郵箱
實時螢光定量pcr基線和閾值怎麼調整
14樓：為青生物
不同的儀器是不同的，abi系列的儀器比較簡單，在analysis中設定。有些儀器好像是不能設定的
螢光定量PCR標準曲線,做實時螢光定量PCR實驗時,為什麼做標準曲線
具體情況要看你做的這個基因在兩個物種中的同源性。如果同源性很高,可以用同一對引物,回同一條探答 針的話,那我們就認為它在realtimepcr中的擴增效率是一樣的,標準曲線只要做一次就行了,對資料分析不會有影響 我要用ct法做螢光定量pcr,請問需要做標準曲線嗎 最好是做標準曲線,要看看擴增效率的....
實時定量PCR的結果分析實時螢光定量PCR的結果該怎樣分析？
sybergreen可以和所有核酸結合，沒有特異性。所以要保證特異性的話，最好用其他的方法。擴增體系中加入模板dna的體積，比如同時10微公升的體系，對照組加1微公升dna，實驗組加2微公升dna，則實驗組的加樣量是對照組的2倍。看ct值是分析螢光定量pcr最直觀的乙個資料，ct值一般在35左右就失...
螢光定量pcr裡的相對定量裡算delta deltaCt的對
你都有標準曲線了。就不用做delta deltact了，直接用樣本的ct值帶入標準曲線就可以了。delta deltact只用於相對值的測量。每乙個delta代表ct值相減一次。第一次是目標基因對照組和實驗組的ct值相減。第二次是內參基因對照組和實驗組ct值相減。得到的兩個數值算為2的xx次方，就是...