1樓:匿名使用者
實驗材料:1.材料和試劑。
1),巴比妥——巴比妥鈉緩衝液。
巴比妥鈉 g
巴比妥 g硫柳汞 100 mg(防腐劑)
蒸餾水加熱溶解並定容至500ml
2)1%預復瓊脂(或瓊脂糖)
1g瓊脂(或瓊脂糖)加蒸餾水100ml溶化即可。
3)1%瓊脂糖凝膠。
1g瓊脂糖加50ml蒸餾水置水溶中煮沸溶解或用與波爐加熱溶解(注意不要溢位且注意加入蒸發的水),然後再加入50ml上述巴比妥緩衝液混勻,置4℃儲存備用。
4)抗原及相應免疫血清。
2.裝置和器材。
玻璃板、模具,打孔器和挑針、滴管、有蓋搪瓷盒(內鋪有溼潤的濾紙)、溫箱(25℃)、三角燒杯、玻璃攪拌、微量加樣器、其他常用器材。
四 操作步驟:
1.預復瓊脂玻板的製備。
將溶化的1%預復瓊脂用滴管加玻板上,使之能將表面覆蓋即可,放於溫箱內乾燥(或自然乾燥),即可用以製備凝膠板。
2.凝膠板的製備。
溶化瓊脂糖,在水平桌上將溶化的瓊脂糖倒在預復瓊脂玻板上,製成厚度約3~4mm厚的瓊脂糖凝膠板,待冷卻後根據所需形狀打孔(注意不宜在室溫下放置過久,儘量縮短操作時間,以免乾燥)。
梅花型:3.免疫擴散及結果觀察。
將抗原加入中心孔,腔或倍比稀釋的免疫血清加入周圍孔,留1孔加雙蒸水,以作空白對照(注意:加樣至孔滿為止,不可外溢)。待孔內液體滲入凝膠後即可放於溫盒中(如需要可重複加樣,加樣間隔時間應掌握在第一次加樣後孔內液體尚未完全擴散完的情況下即加入,以免孔周圍形成不透明的白色圈)。
溼盒於25℃中,一般保溫24~48h,觀察抗原抗體產生的白色沉澱線。
免疫血清的滴度以一定抗原濃度下出現白色沉澱線的最高稀釋度來表示。
如不知抗原濃度是否與免疫血清相當時,抗原也可倍比稀釋,多做幾個梅花孔以作比較。
4、標本的儲存。
為了儲存標本,可染色處理,步驟如下:判盯。
1)用生理鹽水浸洗待儲存的玻板2~3天,每天換水1~2次,洗去多餘的抗原抗體及其他蛋白。
2)浸洗後於玻板的凝掘圓和膠上加5%甘油或用瓊脂填孔防裂,用溼的優質濾紙覆在凝膠上(兩者之間不要有空氣),37℃過液使其徹底乾燥。
3)打溼濾紙,輕輕揭下,洗淨膠面。
4)用氨基黑(用5%醋酸配)染色10min,再用5%醋酸脫色至背景無色為止,乾燥儲存。也可用考馬斯亮藍(10~20%醋酸配製)染色5~15min,再用10~20%醋酸脫色至背景無色,乾燥儲存。
2樓:匿名使用者
用化學方面的知識來做的。
雙向瓊脂擴散試驗中,抗體含量較大時,反應沉澱線( )。
3樓:考試資料網
答案】:b雙向瓊脂棚孝擴散鏈唯稿,分子量大小決定抗原抗體反應的沉澱線的大小山友,而抗原抗體的濃度決定其擴散距離的遠近。沉澱線彎向分子量大的一方,靠近濃度小的一方。
單向瓊脂擴散試驗應屬於
4樓:考試資料網
答案】:c考點:沉澱反應的應用。
解析]瓊脂擴散試驗利用可溶性抗原和相應的抗源脊體在凝膠中擴散,形成濃度梯度,在抗原與抗體濃度比例恰雹茄滲當的位置上形成肉眼可見的沉澱線或沉納團澱環。
瓊脂擴散試驗的介紹
5樓:奔放神
瓊脂擴散試驗為可溶性抗原與相應抗體在含有電解質的半固體凝膠(瓊脂或瓊脂糖)中進行的一種沉澱試驗。瓊脂在實驗中只起網架作用,含水量為99%,可溶性抗原與抗體在其間可以自由擴散,若抗原與抗體相對應,比例合適,在相遇處可形成白色沉澱線,是為陽性反應。沉澱線在凝膠中可長時間保持固定位置並可經染色後乾燥儲存。
沉澱線(帶)對抗原與抗體具有特異的不可透性,而非特異者則否。所以乙個沉澱線(帶)即代表一種抗原與抗體的沉澱物,因而本試驗可對溶液中不同抗原抗體系統進行分析研究。
雙向瓊脂擴散試驗的介紹
6樓:你讓我心亂了丶
雙向瓊脂擴散試驗常用於定性檢測,也可用於半定量檢測。將抗原與抗體分別加入瓊脂凝膠板上相鄰近的祥猛小孔內,讓它們相互向對方擴散。當兩者在最適當比例處相遇時,閉宴塵即形成一條清晰的沉澱線。
根據有否出現沉澱線,可用已知的抗體鑑定未知的抗原,或用已知的抗原鑑定未知的抗體。臨床常用本方法檢查原發性肝癌患者血清中的甲胎轎禪蛋白,作為原發性肝癌的早期輔助診斷。
單向瓊脂擴散法是將相應的
7樓:考試資料網
答案】:a單向瓊脂擴散法是將抗體混入9g/l瓊脂糖,未凝固前傾注成平板,然後在上打孔,將抗原加入孔中,讓其自由擴散,24~48h後可見孔周圍出現沉澱環,測定環的直徑與待檢標本的關係有兩種方法唯孝:一是manini曲線,適用大分子抗原和長時間擴散的結果,擴散環直徑的平方與抗原濃度是呈線性關係;二是fahey曲線法,適用於小分子抗原和較短做握時間擴散結果指胡稿,濃度對數與擴散環直徑呈線性關係。
雙向瓊脂擴散實驗沒出現沉澱線的原因
抗原分為可溶性抗原和顆粒性抗原,顆粒性抗原指的就是像細菌 紅 細胞這樣的專顆粒,凝集表屬現為凝塊。而可溶性抗原與抗體反應,則表現為沉澱或渾濁,需要數分鐘或數小時才能完成。沉澱線的形成是根據抗原抗體兩者比例所致,沉澱線靠近抗原孔,則提示抗體含量大 靠近抗體孔,則提示抗原含量較多,不出現沉澱線則表明抗體...
如何才能與國家級傳送民意關點 防廠病擴散
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